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我们在1996年利用返回式卫星搭载了水稻种子,经过7代的选育,获得了许多稳定遗传的突变品系.本实验室李常银采用DD-PCR法从空间诱变的稻瘟病敏感品系972-4及其地面对照品系972ck中找到一个EST(AF448491),其表达量上调.生物信息学分析结果表明EST(AF448491)全长基因编码ATP依赖的Clp蛋白酶(AF514859),将其命名为Pi-HIT-1.为了揭示该基因功能以及在水稻抗逆性中的作用机制,本文对Pi-HIT-1基因的表达模式进行了初步研究.通过生物信息学和RT-PCR的方法得到水稻Pi-HIT-1基因的全长cDNA,序列分析表明,该基因cDNA序列与预测结果基本一致,水稻Pi-HIT-1基因含有5个外显子.我们将其3端半长cDNA连入表达载体pGEX-4T-2成功构建了重组Pi-HIT-1蛋白表达载体pGEX-Pi-HIT-1.利用该表达载体转化大肠杆菌BL21中,经IPTG诱导得到GST-Pi-HIT-1融合蛋白.利用亲和层析的方法得到纯化的融合蛋白GST-Pi-HIT-1.利用该蛋白作为抗原免疫家兔成功制备了抗水稻Pi-HIT-1蛋白多克隆抗体.本文对水稻基因Pi-HIT-1的表达模式进行初步的研究.用Western Blot方法分别在翻译水平上研究Pi-HIT-1基因的表达特点包括组织特异性,发育阶段特异性.结果表明,水稻Pi-HIT-1蛋白在所检测的根、叶鞘、叶片、穗四种组织中叶鞘和叶片有表达,而在根和穗中没有检测到Pi-HIT-1蛋白的表达.同时发现,在苗期、分蘖期、穗期三个发育时期的叶片中均有Pi-HIT-1蛋白的表达.在研究水稻基因Pi-HIT-1在各种外界环境压力下的表达情况时发现,水稻Pi-HIT-1蛋白在盐胁迫下表达量有所增加,其中在972ck品系中表达量明显增加.在两种品系中Pi-HIT-1蛋白在冷诱导下表达量均没有明显的变化.在稻瘟病诱导下,972-4品系中的Pi-HIT-1蛋白的表达量明显地增加,而972ck品系中的表达量没有明显的变化.这些实验结果揭示水稻Pi-HIT-1可能与抗逆性密切相关.