一种壮药白花九里明提取物咖啡酸含量、妇科止血作用及机制研究

来源 :广西中医药大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:a442697259
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目的:本课题以壮药白花九里明一种提取物(下面称提取物A)为研究对象,针对白花九里明治疗产后出血药效及作用机理不够清晰,检测指标不够明确的问题进行研究。首先通过测定白花九里明提取物中咖啡酸含量,来了解其中具止血作用有效成分;然后通过考察提取物对小鼠出血、凝血的影响,对大鼠的凝血四项的影响,及对小鼠离体子宫实验,探讨其妇科止血作用;最后从血液和血管两个角度考察提取物对产后出血大鼠模型的影响,从而实现对白花九里明较全面的药效及机理评价研究,为白花九里明的开发利用提供理论基础。方法:第一部分:咖啡酸含量测定:采用高效液相色谱法,使用Agilent色谱柱,以乙腈-磷酸为流动相等度洗脱,测定提取物A的咖啡酸含量。第二部分:妇科止血作用及机制研究:1)对小鼠子宫平滑肌:采用小鼠离体子宫实验法,观察不同浓度提取物A对小鼠正常子宫以及缩宫素干预下小鼠离体子宫的平均张力,收缩活力和收缩频率的影响,以及与阿托品、心得安和乙酰胆碱联合给提取物A后对子宫平滑肌收缩作用影响。2)对未造模出血时间、凝血时间和凝血系统(凝血四项)测定:通过尾尖出血法、载玻片法、毛细玻璃管法对KM小鼠止血时间的影响进行探讨;SD大鼠随机分高、中、低、空白和阳性对照组五组,对大鼠凝血功能指标纤维蛋白原、活化部分凝血活酶时间、凝血酶时间、凝血酶原时间的影响。3)对Wistar大鼠产后出血模型建立:Wistar大鼠随机分高、中、低、空白、阳性、模型组六组,每组20只,采用王氏造模方法造大鼠产后出血模型,测分别给药高、中、低剂量提取物A和阳性药后,对子宫出血量的影响。4)对造模后凝血系统(凝血四项)、血小板粘附性、血小板聚集度、血小板数量的测定。结果:第一部分:提取物A中含有一定量的咖啡酸,咖啡酸在0.12mg-0.195mg范围内与峰面积呈良好的线性关系,回归方程为y(28)12269x(10)150.99,R2(28)0.9996,加样平均回收率99.75%,RSD为0.4%。提取物A本次测量得咖啡酸含量平均值为112.3μg/g。第二部分:1)、0.16mg-0.64mg浓度收缩活力、收缩频率和平均张力有明显变化,数值与生理盐水组比较P<0.05,有统计学意义,呈兴奋作用。提取物A随着浓度增大收缩活力明显增强。M受体阻断剂阿托品与0.32mg提取物A联用,收缩活力和频率均小于单独0.32mg提取物A,且P<0.05,有统计学意义。β1和β2肾上腺素受体阻滞剂心得安与0.32mg提取物A联用,收缩活力和频率均远小于单独0.32mg提取物A,且P<0.05,有统计学意义。M受体兴奋药乙酰胆碱与0.32mg提取物A联用,收缩活力和频率均远大于单独0.32mg提取物A,且P<0.05,有统计学意义。2)、尾尖出血法:给药高、中、低剂量提取物A,均缩短了对小鼠出血时长,中剂量组出血时间最短,与空白组相比,高、中、低剂量提取物A P<0.05,具有显著统计学差异;载玻片法:给药高、中、低剂量提取物A均缩短了小鼠凝血时长,中剂量组凝血时间最短,与空白组相比,高剂量组P<0.05,中、低剂量组P<0.01,具有统计学差异;毛细玻璃管法:给药高、中、低剂量提取物A均缩短了小鼠凝血时间。其中中剂量组凝血时间最短,与空白组相比,高剂量组P<0.05,中、低剂量组P<0.01,具有统计学差异。提取物A可缩短凝血酶原时间,也可缩短活化部分凝血活酶时间。3)、造模部分提取物A对大鼠子宫出血量有显著降低作用,与模型组比较,阳性对照组,和提取物A高、中、低剂量组P<0.05。其中中剂量组出血量最低,止血效果最好。4)、造模后部分对血管作用:提取物A对造模后大鼠均能降低血管中的血管紧张素Ⅱ和前列腺素的含量。与模型组比较,阳性对照组,和提取物A高、中、低剂量组均有部分P<0.05,有显著性差异。对血液作用:对造模后大鼠作用,可以缩短凝血酶原时间P<0.05,可缩短APTT活化部分凝血活酶时间P<0.05,可增加FIB纤维蛋白原P<0.05。提取物A对TT时间增加,但凝血酶时间P>0.05,无统计学意义;与模型组比较,不同剂量提取物A血小板粘附性明显增加,且P<0.05,有统计学意义;与模型组比较,不同剂量提取物A血小板聚集度明显增强,且P<0.05,有统计学意义;EDTA抗凝,与模型组比较,提取物A对造模后大鼠的血小板数量有增多作用,但P>0.05,无统计学意义。枸橼酸钠抗凝,与模型组比较,提取物A对造模后大鼠血小板数量有增多作用,且P<0.05,有统计学意义。结论:1、提取物A具有止血作用的咖啡酸成分;2、不同浓度提取物A对KM小鼠具有收缩子宫平滑肌作用;可能是通过影响M受体、N受体、非选择性的β受体而实现的;3、不同浓度提取物A能够减少出血和凝血时间,初步筛选出凝血系统的止血途径,应该是受到APTT与PT影响的外源性凝血途径和内源性凝血途径;4、提取物A能够减少子宫出血模型的大鼠子宫出血量达到止血效果;5、提取物A针对造模后大鼠可以降低其血管中血管紧张素Ⅱ和前列腺素E2含量,从而修复子宫内膜,收缩血管,减少血流量,达到止血目的;6、提取物A可以增加血小板粘附能力和聚集功能,从而达到止血目的。7、提取物A可以增加血小板数量,促进血凝并形成坚实的止血栓子,达到止血效果。
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