论文部分内容阅读
目的：证明DSS诱导的小鼠溃疡性结肠炎模型构建成功,同时证明PIK3R3在溃疡性结肠炎中发挥重要功能。方法：通过DSS诱导小鼠溃疡性结肠炎模型,检测临床指标、病理改变及炎症细胞的浸润情况,同时检测PIK3R3在模型中的表达水平。运用免疫组化的方法检测溃疡性结肠炎临床标本中PIK3R3的表达情况。结果：DSS诱导的模型小鼠体重下降,结肠缩短；结肠上皮结构破坏,炎症细胞浸润增多；PIK3R3在DSS诱导的溃疡性结肠炎小鼠结肠及溃疡性结肠炎临床组织标本中呈现高表达。结论：DSS诱导的溃疡性结肠炎模型构建成功。PIK3R3在DSS诱导的溃疡性结肠炎模型及临床标本中表达水平升高,PIK3R3在溃疡性结肠炎发病中发挥重要功能。目的：通过DSS诱导的溃疡性结肠炎小鼠模型,评估TAT-N15在溃疡性结肠炎中的治疗作用,并与阴性对照(对照多肽)及阳性对照(泼尼松龙)做对比。方法：检测各组小鼠体重情况,结肠长度,疾病活动指数；HE染色评估各组的病理改变并定量评分；免疫组化Ki-67染色评估上皮细胞的损伤情况；运用real-time PCR、 ELISA及流式CBA法评估相关细胞因子的表达。结果：TAT-N 15能抑制模型中小鼠体重的下降,降低疾病活动指数,缓解小鼠结肠长度的缩短;同时能改善病理变化和炎症细胞的浸润;降低Ki-67指数：减少促炎细胞因子的产生。结论：TAT-N 15能有效的降低疾病的临床指标,改善疾病的病理变化,促进炎症的尽快恢复,减少促炎细胞因子的表达。目的：证明TAT-N15能有效的抑制溃疡性结肠炎向炎症相关性结直肠肿瘤的恶性转化。方法：通过构建AOM/DSS诱导的炎症相关性结直肠肿瘤模型,给予TAT-N15药物治疗,观察癌前病变,最终生成肿瘤情况(个数、大小、分布及负荷等),临床指标(溃疡性结肠炎的发病率,疾病活动指数,结肠长度),病理改变,肿瘤的增殖和凋亡(Ki-67及TUNEL),以及细胞因子的表达。结果：TAT-N15能有效抑制癌前病变,肉眼可见肿瘤减少,HE染色显示癌前病变减少；最终形成的肿瘤评估发现TAT-N15组肿瘤数量更少,体积更小,荷瘤量更低；临床指标中：溃疡性结肠炎发病率更低,疾病活动指数更低,结肠长度更长；病理改变更轻；肿瘤的增殖更低,凋亡指数更高；促炎细胞因子表达更低,抑炎细胞因子表达升高。结论：TAT-N15能有效的抑制肿瘤的癌前病变,抑制最终炎症相关性肿瘤的生成。目的：验证在动物模型中TAT-N15能有效的抑制NF-κB信号通路；观察TAT-N15对紧密连接蛋白ZO-1表达的影响及对Treg细胞表达的影响。方法：构建AOM/DSS诱导的动物模型,验证TAT-N15对p-NF-κB p65表达的影响；体外LoVo细胞中证明TAT-N15对p-NF-κB p65的影响；检测动物实验中TAT-N15对ZO-1表达的影响,体外细胞实验中过表达及低表达PIK3R3检测ZO-1的表达变化,LPS诱导的结肠渗透模型中检测TAT-N15对结肠渗透能力的影响；动物模型中,流式细胞学及免疫组化染色检测TAT-N15对Treg细胞比例的影响。结果：在AOM/DSS诱导的动物模型中,TAT-N15能有效的抑制p-NF-κB p65蛋白及p-STAT3蛋白水平,增加了ZO-1蛋白的表达,同时可升高Treg细胞的比例；细胞实验中,TAT-N15对p-NF-κB p65的表达水平存在时间及剂量依赖关系,能有效抑制p-NF-κB p65表达,对PIK3R3本身表达无影响；LPS诱导的渗透试验中,TAT-N15能降低肠道的渗透能力。结论：TAT-N15通过抑制NF-κB通路抑制炎症,同时增加肠道紧密连接蛋白的表达,增加Treg细胞的比例保护肠道的免疫功能。