右归丸对肾阳虚证能量代谢相关MicroRNAs表达的影响

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目的:
  探讨右归丸对肾阳虚证患者能量代谢相关miRNAs表达的影响,为临床治疗肾阳虚证及右归丸的干预作用机制提供科学依据。
  方法:
  1.采用肾阳虚证诊断评分细则量表诊断与专家诊断相结合的方法,选取14例肾阳虚证患者为研究对象,予以右归胶囊(1.8g/次,3次/日)口服2月后,治疗前后分别抽取静脉血5ml留样,以备提取白细胞总RNA。
  2.应用miRNA芯片,筛选出有显著差异表达miRNAs,运用MirBase软件预测差异表达miRNAs的靶基因,采用PubMed文献数据库检索能量代谢相关作用的差异表达miRNAs功能。
  3.运用DAVID软件对靶基因从MF、CC、BP、KEGGPathway四个方面进行富集,整理出能量代谢相关的功能项,筛查肾阳虚证能量代谢相关的调控通路,分析右归胶囊对肾阳虚证能量代谢的调控作用。
  结果:
  1.根据Foldchange>6或<1/6且P-value<0.01为筛选条件,获得右归丸疗效相关差异表达miRNAs74条,其中有29条表达上调,45条表达下调。
  2.靶基因预测(Foldchange>15,靶基因数大于100条,预测评分大于90),其中hsa-miR-3658有371条,hsa-miR-5582-5p有161条,hsa-miR-548m有61条等。
  3.DAVID功能分析结果:差异表达miRNAs的靶基因功能在生物过程(BP)层次共涉及193个功能条目,其中与能量代谢相关的为17个,主要涉及线粒体氧化还原反应过程;在细胞成分(CC)层次共涉及97个功能条目,其中与能量代谢相关的为10个,主要参与构成线粒体及线粒体复合物;在分子功能(MF)层次共涉及104个功能条目,其中与能量代谢相关的为15个,主要涉及氧化还原反应相关的活性酶和结合蛋白。
  4.差异表达miNRAs靶基因注释到共86条KEGG分子通路,能量代谢相关通路主要有AMPK信号通路、胰岛素信号通路、HIF-1信号通路、甲状腺激素信号通路。mTOR信号通路、丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶等并非主要调节能量代谢途径,但其蛋白激酶的表达能够参与影响能量代谢过程。
  结论:
  1.通过右归丸对肾阳虚证的干预作用,与调控能量代谢功能密切相关的miRNAs有miR-487b-3p、miR-424-5p、miR-323a-3p
  2.右归丸疗效的发挥与AMPK信号通路、胰岛素信号通路、甲状腺激素信号通路、PI3K-Akt信号通路、HIF-1信号通路的调控有关,差异表达miRNAs靶基因不仅作用于自身信号通路还会影响其他信号通路的调控。
  3.右归丸可以通过调节miRNAs的表达而改善肾阳虚证能量代谢功能低下状态。这种调控作用并非单一功能miRNA作用的结果,而是多功能靶基因、多通路间相互影响、共同作用的结果。
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