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目的:
探讨谷胱甘肽转硫酶(GST)M1、T1、P1基因型与中国浙江汉族人群散发性大肠癌(SCRAC)易感性的关系。
方法:
1、选取经病理组织学确诊的120例SCRAC患者,均来自我院消化内科及普外科住院或门诊患者;204例健康对照来自同期我院体检中心健康体检者。全部研究对象均为无血缘关系的中国浙江汉族人,SCRAC患者采血前均未行放射及化学治疗。
2、提取基因组DNA:采用蛋白酶K/酚/氯仿法抽提DNA,紫外分光光度计定量,4℃保存备用。
3、分别对GSTM1、GSTT1、GSTP1基因进行多态性检测。
3.1采用多重聚合酶链反应(Multi-PCR)技术分别扩增GSTM1、GSTT1目的基因,以β球蛋白(268bp)为参照物,用5%聚丙烯酰胺凝胶电泳及1.8%硝酸银染色检测PCR产物,GSTM1、GSTT1扩增后产物长度分别为157bp、480bp。GSTM1、GSTT1基因型判断:若有157bp片段和480bp片段者分别为GSTM1(+)和GSTT1(+),而无相应的扩增产物者为纯合子基因缺失,分别为GSTM1(-)(即空白GSTM1基因型)和GSTT1(-)(即空白GSTT1基因型)。
3.2采用多重聚合酶链反应技术扩增GSTP1目的基因,PCR反应产物用BsmAⅠ限制性内切酶消化,以β球蛋白(268bp)为参照物,酶切产物用8%聚丙烯酰胺凝胶电泳及1.8‰硝酸银染色检测。GSTP1基因型判断:若酶切产物含329bp、113bp两个片段,则为ILe/ILe基因型(野生型);若酶切产物含329bp、216bp、113bp三个片段,则为ILe/VaL基因型(杂合突变型);若酶切产物含216bp、113bp两片段,则为VaL/VaL基因型(纯合子突变型)。
4、进行统计学处理,分析比较GSTM1、GSTT1、GSTP1基因型在SCRAC患者和健康人群中的分布差异。将所有数据输入SPSS11.5统计软件包,采用x2检验分析数据,计算OR值和95%可信区间,P>0.05有统计学意义。
结果:
GSTM1(-)、GSTT1(-)及GSTP1突变基因型(VaL/VaL)频率在SCRAC组和对照组分布均有显著性差异(57.5%vs44.1%,x2=5.414,P=0.020,OR=1.714,95%CI:1.087~2.702:53.3%vs41.7%,x2=4.140,P=0.042,OR=1.600,95%CI:1.016~2.519:45.0%vs30.4%,x2=7.015,P=0.008,OR=1.874,95%CI:1.174~2.990)。根据SCRAC临床特征进一步分层分析,发现GST(M1、T1、P1)基因型均与年龄因素无关(P>0.05);GSTM1(-)及GSTP1突变基因型(VaL/VaL)在远端SCRAC(P=0.035;P=0.036)、DukesC期SCRAC(P=0.002;P=0.029)及低分化SCRAC(P=0.013;P=0.006)中的分布频率均明显增高;GSTT1(-)基因型则仅在低分化SCRAC中明显增高(P=0.040),而与SCRAC的部位及Dukes分期无关(P>0.05)。
结论:
GST基因多态性与中国浙江汉族人群SCRAC明显相关,携带GSTM1(-)、GSTT1(-)及GSTP1突变基因型(VaL/VaL)者发生SCRAC的易感性增加。