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弓形虫病是一种由刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)引起的人兽共患寄生原虫病。弓形虫可广泛寄生于包括人类在内的所有哺乳动物及鸟类体内,并呈世界性分布。据报道,全球约1/3的人感染弓形虫,而在我国则有约7.9%的人感染弓形虫。弓形虫病对畜禽的危害也很严重,许多畜禽如猪、牛、猫、犬、羊、马、骆驼、家兔、鸡、鸭等都可以感染弓形虫,给畜牧业带来巨大损失。另外,对于那些自由觅食的禽类(如散养的鸡),其弓形虫的感染率可以较好地反映人们居住环境中(土壤,水等)弓形虫卵囊的含量,因此研究禽弓形虫病具有重要的公共卫生学意义。
建立持续稳定的弓形虫人工感染动物模型可为进一步进行弓形虫的生活史、生理代谢、致病机理、药物筛选等方面的研究打下基础。本试验在前人研究的基础上,建立了雏鸡人工感染弓形虫病的模型。将弓形虫速殖子通过静脉接种的方式感染35日龄的健康雏鸡,发现除感染杂菌死亡的一只以外,其余所有接种雏鸡通过改良凝集试验(MAT)检测证实均感染了弓形虫,且在感染后第7天即有弓形虫特异抗体出现,一直持续到试验结束(35d p.i.),其抗体最高峰出现在感染后21天(抗体滴度为1:640)。
运用PCR方法对接种雏鸡体内的弓形虫DNA进行检测,发现最早在感染后14天于雏鸡心脏内检测出,并一直持续到感染后28天,将PCR检测结果为阳性的组织通过盐酸-胃蛋白酶溶液消化处理,制作成组织悬液接种至小白鼠体内,并分离得到了弓形虫类似体。提取该生物的DNA,经特异PCR检测方法及测序证实分离到的弓形虫类似体为刚地弓形虫。对本次试验中雏鸡PCR检测阳性的组织进行统计分析,发现心脏是本次感染雏鸡检出率最高的组织,其次是肺、脑、脾,再次是眼,最后是肝脏。
本论文第二部分采用MAT对广东省及其周边地区的鸡、鸭、鹅、鸽等禽类血清进行了弓形虫IgG抗体检测,结果显示:鸡的血清学阳性率为8.43%(51/605),其中散养鸡的阳性率为11.4%(41/361),笼养鸡的阳性率为4.1%(10/266),鸭的阳性率为16.0%(56/349),鹅的阳性率为14.96%(51/247),其中农户家饲养的鹅阳性率为16.87%(14/83),农场饲养的阳性率为14.14%(27/191),鸽子的阳性率为8.7%(24/275)。调查结果表明这些家禽周围环境被弓形虫及其代谢物污染,应引起足够的重视。
本研究成功建立了人工感染雏鸡弓形虫病的动物感染模型,接种虫体组经MAT检测发现,在接种后第7天至第35天均有抗体产生(感染杂菌死亡的雏鸡除外),且抗体滴度在1:5至1:640之间,在感染后第21天达到高峰。证实MAT是一种检测鸡弓形虫特异抗体的敏感、特异、快速、简便的血清学方法。在建立人工感染雏鸡弓形虫病的实验模型的基础上,本研究成功运用分子生物学方法(PCR)对感染的雏鸡体内弓形虫DNA进行检测。结果表明该方法检测雏鸡体内弓形虫DNA敏感性高,持续时间较长,适用于对鸡弓形虫病进行诊断以及分离弓形虫DNA,填补了研究空白。在上述实验基础上,采用改良凝集试验(MAT)对广东省及其周边省份的鸡、鸭、鹅、鸽等禽类血清进行弓形虫病的流行病学调查,获得了广东省禽感染弓形虫病的第一手资料,为进一步防控禽弓形虫病奠定了基础。