目的脑出血(intracerebral hemorrhage, ICH)是指源于脑实质内血管的非创伤性自发出血。出血也可破入脑室或蛛网膜下腔。ICH占所有卒中的10%—15%。脑出血可以发生在脑实质的任何部位,可以单发,也可为多发。原发性ICH通常是由于长期高血压或淀粉样脑血管病(cerebral amyloid angiopathy, CAA)或脑动脉粥样硬化等作用下发生病理改变的小血管或小动脉自发破裂造成的。脑出血是受环境因素和遗传因素共同影响的多因素疾病,流行病学研究显示高血压、高脂血症、高龄、过量饮酒、吸烟、身体质量指数、糖尿病是ICH的危险因素。近年来,随着脑出血家族聚集现象的发现,遗传因素在脑出血发病中的作用引起了人们的关注,成为研究的热点。进入21世纪越来越多的研究发现NFAT家族可作为细胞内多信号转导通路的基础因子,可以调节T细胞、B细胞内很多因子和IL-2、IL-3、IL-4、IL-5、IL-6、粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor, TNF-α)和环氧化酶-2(cyclooxygenase-2, COX-2、Apob、nurr77等多种细胞因子的表达水平。由于TNF-α基因与原发性高血压和血脂异常及动脉粥样硬化密切相关,COX-2与动脉粥样硬化密切相关,Apob、IL-6、nur77、SREBP-1与血脂异常密切相关,T细胞与血管内膜炎性反应密切相关,而NFATC1参与调解TNF-α的活化,在TNF-α启动因子中包含转录因子NFATC1潜在的结合位,NFATC1对TNF-α基因活化起重要作用,NFATC1参与调解COX-2的表达,NFATC1的调控与COX-2的表达呈正相关,NFATC1基因exon-2上存在转录因子SREBP-1的绑定位点,直接参与对SREBP-1因子表达的负调控,NFATC1还参与调解nur77的表达,NFATC1通过调控T细胞内诸多因子的表达使在正常动脉内膜未见或罕见T细胞在病变区域广泛浸润到血管内膜,产生炎性反应。因为原发性高血压是脑出血的重要的独立预测因素,血脂异常及脑动脉粥样硬化是脑出血的重要病理基础,NFATC1参与调控与高血压、动脉硬化、血脂异常密切相关的因子,NFATC1通过调控T细胞内多种因子参与病变区域血管内膜的炎性反应,所以我们有理由相信转录因子NFATC1是与脑出血性卒中密切相关的基因。目前转录因子NFATC1在脑出血中的表达及作用机制尚不明确,尤其是脑出血与NFATC1基因多态性是否存在联系在国内外尚没有研究,这需要我们进行大量工作以明确NFATC1基因多态性与脑出血的关系,从分子水平探讨脑出血的发病机制,若此相关性存在,在人群中进行该基因调查,可及早发现高危脑出血人群,并实施个性化治疗,从而更有效的预防和控制脑出血的发生。将给临床预防和治疗脑出血的工作带来新的希望。方法采用病例-对照研究方法,病例组选取中国北方脑出血患者230例,男144例、女86例,年龄在33-85岁间,均为汉族,彼此无亲缘关系,对照组选取性别、年龄、民族与病例组相匹配的健康个体233例,男146例、女87例本研究采用问卷调查及查体等方式,记录被研究者的基本情况(性别、年龄、BMI、收缩压、舒张压、嗜烟酒史等),采用日立7600全自动生化分析仪测定脑出血患者和正常人群血清的总胆固醇(total cholesterol, CHO)、甘油三脂(triacylglycerol, TG)、低密度脂蛋白(low density lipoprotein, LDL)及高密度脂蛋(high density lipoprotein, HDL)。载脂蛋白-a(Apo-a)、载脂蛋白-b(Apo-b)值,采用双脱氧末端终止测序法研究了NFATC1第2外显子上的功能性SNPS,聚合酶链反应方法研究了第7内含子可变数量串联重复多态性(VNTR)、多聚酶链式反应和限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)方法研究第9号外显子上的多态性位点rs754093(Cys751Gly)与脑出血的关系,此结果再经双脱氧末端终止测序法进一步确认。用拟合优度卡方检验验证每个位点基因型在抽样群体中的分布是否符合H-W平衡,应用统计分析软件包(Statistical Packages for Social Sciences, SPSS13.0)和EXCEL建立数据库,需要统计的计量资料均进行正态性检验,正态分布的各统计资料均以均数±标准差表示,偏态分布先进行对数转换,再行比较。采用t检验方法分析病例组与对照组中血脂等计量资料的差异,χ2检验方法分析病例组与对照组人群基本背景情况计数资料的差异,四格表和R×C列表χ2检验方法分析病例组与对照组中等位基因和基因型的频数分布差异,单因素方差分析方法分析病例组各基因型间血脂关系的差异。P<0.05为统计学显著性差异。采用Logistic回归分析判断脑出血各危险因素作用的大小,分别计算各自的比值比(OR)及其95%可信区间(CI)。以OR的95%CI不包含1为统计学显著性差异。结果1、病例组与对照组在性别(Gender)、年龄(Age)、体质质量指数(BMI)构成上无统计学差异(P>0.05)。病例组中患高血压病(Hypertension)、糖尿病(Diabetesmellitus)、高脂血症(hyperlipidemia)及嗜烟(Smoking)嗜酒(drinking)者与对照组相比,显著增高(P<0.05)。病例组的甘油三脂(TG)、载脂蛋白a(Apoa)与对照组相比,差异无统计学意义(P>0.05)；病例组高密度脂蛋白(HDL)、低密度脂蛋白(LDL)、载脂蛋白b (Apob)、收缩压(SBP)、舒张压(DBP)、均显著升高,而总胆固醇(CHO)显著降低,与对照组相比有显著性差异(P<0.05)。2、所有研究对象的每个多态性基因型在抽样群体中的分布均符合H-W平衡,表示所选取的样本具有人群代表性适合做遗传学分析。3、经双脱氧末端终止测序法鉴定第2外显子rs1051978、rs62096875、rs12605457、rs1063669、rs61731547各位点SNP基因型,rs1051978为A／C二态,A／A基因型频率病例组低于对照组,A／C基因型频率病例组高于对照组,基因型频率比较χ2=0.349,P=0.555,；等位基因频率比较χ2=0.35,P=0.661。经卡方检验病例组和对照组此基因型分布无显著性差异。rs62096875为G／G纯合子,rs12605457为C／C纯合子、rs1063669为G／G纯合子、rs61731547为C／C纯合子,没有发现新的突变位点。4、第7内含子可变数量串联重复(variable number tandem repeat VNTR) L/L、S／S基因型频率病例组均低于对照组,而L／S基因型频率高于对照组,基因型频率比较χ2=0.957,P=0.620,等位基因频率比较χ2=0.12,P=0.727。经卡方检验病例组和对照组基因型分布无显著性差异。5、NFATC1第9外显子SNP rs754093病例组与对照组相比,T／T、T／G基因型频率均低于对照组,而G／G基因型频率明显高于对照组,基因型频率比较χ2=6.343,df=2,P=0.042；T／G等位基因频率比较χ2=6.39,df=1,P=0.011,OR=1.411,95%CI=1.080-1.843。经卡方检验病例组和对照组此基因型分布存在显著性差异。6、病例组rs754093 T／G各基因型与各项血脂、血压指标的关系,经方差分析(ANOVA)发现各基因型之间CHO、LDL、Apob和收缩压存在显著性差异。组间两两比较显示,GG基因型的CHO、LDL、Apob明显高于T／T和T／G基因型。GG基因型的CHO与T／T和T／G基因型比较F=10.423,P=0.000存在显著性差异,GG基因型的LDL与T／T和T／G基因型比较F=23.398,P=0.000存在显著性差异,GG基因型的Apob与T／T和T／G基因型比较F=32.176,P=0.000存在显著性差异,GG基因型的收缩压高于T／G基因型且明显高于T／T基因型,GG基因型的收缩压与T／T基因型比较F=2.129,P=0.042存在显著性差异。rs754093 T／G各基因型间糖尿病,嗜烟,嗜酒,BMI等情况无显著性差异。7、通过应用多元逐步Logistic回归分析,得出rs754093 GG基因型是脑出血的独立的危险因素之一(OR=3.902,95%CI 1.735～8.755,P=0.001)。此外,与脑出血相关的其他危险因素有LDL、Apob、收缩压升高。结论1、高血压病、糖尿病、高脂血症及嗜烟、嗜酒与脑出血密切相关,高密度脂蛋白、低密度脂蛋白、载脂蛋白b、收缩压、舒张压、总胆固醇与脑出血密切相关。甘油三脂、载脂蛋白a与脑出血无显著相关性。2、第2外显子上的功能性SNPS rs1051978、rs62096875、rs12605457、rs1063669、rs61731547与中国辽宁地区汉族人群脑出血没有显著的相关性。3、第7内含子可变数量串联重复(VNTR) L/S基因型与中国辽宁地区汉族人群脑出血的发病无相关性。4、NFATC1第9外显子上的rs754093 G／G基因型是中国辽宁地区汉族人群脑出血独立危险因素,其风险性主要来源于G等位基因。5、NFATC1基因是与中国辽宁地区汉族人群脑出血发病相关的易感性基因,NFATC1基因的SNP rs754093 T／G等位基因可能是脑出血易感突变位点,G等位基因与脑出血的风险增加有关.6、NFATC1 rs754093 G/G基因型与脑出血发病危险因素CHO LDL、Apob、收缩压升高密切相关。7、LDL、Apob、收缩压升高也是脑出血的独立危险因素。