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目的:研究外周血中CD34<+>/CD 133<+>/VEGFR-3<+>LEPCs(lymphatic endothelial progenitor cells)的生物学特征，探讨VEGF-C/VEGFR-3信号途径在淋巴管内皮祖细胞向淋巴管内皮细胞分化中的作用。研究VEGF-C、SDF-1、MCP-1和G-CSF对CD34<+>/CDl33<+>/VEGFR-3<+>LEPCs趋化迁移和体内动员的作用。
方法:用Percoll密度梯度离心法从外周血分离单形核细胞，再用流式细胞仪从单形核细胞分选VEGFR-3<+>细胞。共聚焦激光扫描显微镜下观察VEGFR-3<+>细胞的CD34和CD133表达以及CXCR-4的表达。通过VEGF-C诱导使LEPCs细胞向淋巴管内皮细胞分化。在共聚焦激光扫描显微镜下观察由LEPCs分化而成的淋巴管内皮细胞的LYVE-1和5-核苷酸酶的表达，并在扫描电镜和透射电镜下观察LEPCs在分化过程中的表面形态和超微结构变化。通过跨膜迁移实验观察VEGF-C、SDF-1、MCP-1和G-CSF对LEPCs的趋化作用，用扫描电镜观察迁移细胞的形态特征。在小鼠皮下分别注射VEGF-C、SDF-1、MCP-1和G-CSF，用流式细胞仪检测外周血单形核细胞中LEPCs数目，同时用全自动血样分析仪计数白细胞。
结果:外周血中VEGFR-3<+>细胞同时表达CD34和CD133。外周血单形核细胞中的CD34<+>/VEGFR-3<+>细胞为0.13％，VEGFR-3<+>/CD133<+>细胞为0.08％。LEPCs的体积比单纯CD34<+>细胞大，直径约为15μm。经VEGF-C诱导后，细胞数目增多。细胞变为梭形，伸出板状伪足和许多丝状伪足。诱导后1周，细胞表达第Ⅷ凝血因子相关抗原。诱导后2周，细胞表面出现小凹，细胞内可见Weibel-Paladedx体，表达淋巴管内皮特异性标志物LYVE-1和5-核苷酸酶，CD133表达消失。LEPCs细胞的细胞膜表达CXCR-4。细胞跨膜实验显示，与对照组相比，VEGF-C、SDF-1、MCP-1和G-CSF组跨膜迁移细胞的百分率增大，用VEGFR-3和CXCR-4阻断抗体处理后VEGF-C和SDF-1对LEPCs的趋化迁移作用明显降低。注射VEGF-C、SDF-1、MCP-1和G-CSF后，小鼠外周血中LEPCs的数量明显增多。未检测到白细胞发生明显变化。
结论:在VEGF-C诱导作用下，外周血中的CD34<+>/CD133<+>/VEGFR-3<+>LEPCs能向淋巴管内皮细胞分化。VEGF-C/VEGFR-3信号途径在LEPCs的分化过程中起着重要作用。VEGF-C、SDF-1、MCP-1和G-CSF对LEPCs有趋化迁移和动员作用，VEGF-C/VEGFR-3和SDF-1/CXCR-4信号途径在LEPCs趋化迁移方面起着重要调控作用。