目的:本课题将脱细胞猪小肠黏膜下层（Small intestinal submucosa,SIS）与肝素及分泌型Klotho（Secreted Klotho,SKL）交联,人工缝合构建小口径生物活性血管。将制备的小口径血管移植入新西兰大白兔中替换自体左颈动脉,分期于手术完成后的1、2、8、12周取材,通过免疫组化、免疫荧光、Western blot等方法,观察人工血管的组织学、炎症、血管平滑肌细胞（Vascular smooth muscle cells,VSMCs）新生等相关指标的表达情况,检测管壁力学性能改变,探究SKL对SIS人工血管管壁的细胞与细胞外基质重塑及力学性能的影响。方法:1.采用Lipofectamine3000将SKL质粒和对照质粒分别转染至HEK293细胞。转染48h后,Western blot验证细胞与培养基中的SKL蛋白表达。收集SKL过表达的HEK293细胞的无血清培养基,通过His Gravi Trap蛋白纯化镍柱提纯SKL重组蛋白。考马斯亮蓝染色和Western blot检测SKL重组蛋白的纯度。2.体外:培养VSMCs,将其均匀平铺在六孔板中,将提纯后的SKL重组蛋白分为不同的浓度刺激细胞,浓度分别为（0μg/ml、0.1μg/ml、1μg/ml、10μg/ml）,培养48h后提取细胞蛋白,检测不同浓度的SKL对Notch-3、PFAK、α-SMA蛋白的表达影响。3.体内:将成功脱细胞的SIS膜先后交联肝素与SKL,交联完成后手工缝制为直径2mm的管状材料,构建人工血管,然后将其移植入兔颈动脉来替换部分自体血管。动物实验共分成三组;正常饲养不做处理,N组;交联肝素的SIS组（SIS+肝素）;交联肝素和SKL的SKL组（SIS+肝素+SKL）。术后1、2、8、12周取移植的人工血管。通过多普勒超声、苏木素-伊红染色、地衣红染色、茜素红染色等观察血管通畅、弹力纤维以及钙化的情况。通过免疫组化检测CD68与CD204的表达观察炎性细胞浸润。通过免疫荧光检测CD34、α-SMA、CD31在管壁和管腔的表达分布,观察VSMCs及内皮细胞的生成及来源。力学试验机检测移植血管的极限抗拉强度和弹性模量。结果:1.Western blot结果显示SKL组的SKL蛋白表达量较于N组明显上升。2.体外:Western blot结果显示,Notch-3、P-FAK、α-SMA的表达随着SKL浓度的升高而上调。3.体内:超声多普勒超声结果显示,相较于自体颈动脉,SIS组管径扩张明显,SKL组管径更接近于自体动脉。HE染色显示SKL组血管重塑效果最佳。Masson染色表明SKL组胶原含量增加。地衣红染色显示,SKL组弹力纤维含量更高。茜素红染色结果显示,SKL组显著降低血管钙化。免疫组化检测人工血管炎症细胞浸润结果表明,相较于SIS组,SKL组M2型巨噬细胞数量增加,具有抑制炎症作用。免疫荧光结果显示在SKL组中发现了具有外周血来源VSMCs祖细胞与新生VSMCs。结论:交联SKL蛋白的SIS人工血管可以促进巨噬细胞向M2型转换,具有抑炎作用;SKL通过上调Notch-3和α-SMA促进VSMCs成熟,生成的ECM提升血管的力学特性;SKL蛋白促进外周血来源VSMCs祖细胞转换为收缩性VSMCs,促进管壁重塑。