【摘 要】
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该研究的目的是建立胶州湾浮游桡足类18S rDNA的变异类型文库,通过DNA系统学分析揭示该水域浮游桡足类的多样性.采用碱煮法提取胶州湾浮游动物总DNA,引物(247F/1701R)特异性
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该研究的目的是建立胶州湾浮游桡足类18S rDNA的变异类型文库,通过DNA系统学分析揭示该水域浮游桡足类的多样性.采用碱煮法提取胶州湾浮游动物总DNA,引物(247F/1701R)特异性地扩增桡足类18S rDNA的1.5kb片段,由于测通这样长度的序列需要3个反应,测序费用高,后来将引物247F和真核生物反向通用引物EK1269R结合,扩增该基因的约1kb片段,分别构建了质粒文库,对重组子进行VspI和Bsh NI酶切筛选不同OTU类型,并对每种OTU类型代表克隆进行测序,共获得3条1.35kb和8条1kb序列.然后,结合甲壳纲不同亚纲接近全长的18S rDNA序列进行了系统学分析.引物247F和701R具有良好的特异性,能从浮游生物混合样中特异性扩增浮游桡足类的18S rDNA,引物247F和EK1269R在一定程度上扩大了覆盖的种类,增加了OTU类型;两对引物都扩增出两种高丰度类群和一个低丰度类群,优势类群为哲水蚤目.根据各OTU类型的丰度计算获得的遗传多样性指数相近,分别为0.95和0.96,表明18S rDNA基因1.5kb和1kb所包含的遗传变异信息相近.该基因的保守区和变异区分布也说明1.5kb和1kb所包含的遗传变异信息相近.遗传距离矩阵、BLAST分析和系统树构建都表明所获序列都是来源于桡足亚纲,所获序列之间差异变化范围是0.03-13.3﹪.AY437862,AY491388,AY491390与太平洋哲水蚤的序列同源性最高,达98﹪以上,分支节点支持率在99﹪以上,可以确定为哲水蚤属.除AY437863和AY491391只能确定为桡足亚纲外,其余序列都为哲水蚤目.
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