康脑液对脑缺血再灌注大鼠神经再生的影响

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脑卒中是一种发病率高、病死率高、致残率高和复发率高的神经系统损伤疾病,WHO调查结果表明脑卒中致死率仅次于癌症和心肌梗死,居世界第3位。而最新统计结果表明,中国每年脑卒中的新发病例为200万左右,死亡病例为100多万,而脑卒中发病后幸存的患者中,残疾率高达75%,这不仅给家庭和生活带来经济等方面的负担,同时也给社会带来重担[1],流行病学统计显示,脑卒中的缺血性卒中(cerebral ischemic stroke)已经成为中国人群脑卒中疾病的主体[2]。神经干细胞(neural stem cells,NSCs)的发现打破了神经不可再生的桎梏[3]。因此,如何在各种脑损伤后运用药物等方法调节干细胞再生反应是今后内源性NSCs动员治疗缺血性卒中的方向[4]。研究证实,康脑液具有抗氧化、促进血管新生的作用[5]。本实验通过观察康脑液对神经再生特异性标识物Brdu、GFAP、Nestin及Nestin mRNA的表达,在康脑液影响大鼠脑缺血后神经再生方面做进一步研究,为康脑液尽早应用于临床提供有力依据。将健康雄性SD大鼠150只随机分为5组:假手术组(Sham-operated,n=30),模型组(Model,n=30),康脑液高剂量组(KNY H,n=30),康脑液中剂量组(KNY M,n=30),康脑液低剂量组(KNY L,n=30)。建立右侧局灶性脑缺血模型,于缺血后2 h及24 h进行神经功能缺损评分,再灌注1,3,7,14 d后通过TTC染色方法观察大鼠脑梗死体积变化,通过HE染色观察海马CA1区细胞的形态学改变,通过免疫组化检测各组海马CA1区胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、巢蛋白(Nestin)的表达,免疫荧光法检测各组Brdu/GFAP、Brdu/Nestin的表达,原位杂交法检测Nestin mRNA的表达。与假手术组比,缺血再灌注后,模型组大鼠脑神经功能缺失程度明显,脑梗死范围增大,海马CA1区神经细胞数量减少,分布散乱,细胞之间距离变宽,核固缩浓染,术后的神经功能缺损评分显著升高(P<0.01);与模型组比,康脑液预处理组后,大鼠的神经功能评分、脑梗死体积显著降低(P<0.05或P<0.01),病理形态变化显著改善,康脑液同时参与减弱脑组织海马CA1区GFAP表达,增强Nestin、Nestin mRNA及Brdu的表达,有显著性差异(P<0.05或P<0.01)。上述结果提示,康脑液能抑制海马CA1区GFAP蛋白表达以抑制瘢痕增生,同时促强Nestin、Brdu、Nestin mRNA的表达,康脑液可能通过促进脑细胞增殖,同时促进神经干细胞分化,抑制胶质瘢痕增生这一途径促进神经再生。
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