FTY720对大鼠急性脊髓损伤后RhoA表达和后肢运动功能恢复的影响

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目的:通过观测大鼠急性脊髓损伤(spinal cord injury,SCI)后不同时间RhoA表达水平和后肢运动功能恢复情况,研究芬戈莫德(fingolimod,FTY720)与大鼠急性SCI后RhoA表达及后肢运动功能之间的相关性,进一步探讨其治疗大鼠SCI的可能机制,为修复SCI提供新的途径。方法:(1)健康SD大鼠90只,参照改良Allen’s法建立T10急性SCI模型,撞击位置为T10,撞击强度为40gcf,随机分为假手术组(A组)18只:只行椎板切除术,术后30min腹腔注射生理盐水;损伤组(B组)36只:SCI后30min腹腔注射生理盐水;FTY720组(C组)36只:SCI后30min腹腔注射FTY720 0.5mg·kg-1。分别于造模成功后1天、3天、7天、14天及21天,假手术组取3只实验动物,损伤组和FTY720组各取6只实验动物切取损伤段脊髓,并于损伤节段中心横断一分为二,分别用于行逆转录多聚酶链式反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)检测RhoA mRNA的表达和Western印迹法检测RhoA蛋白的表达,在基因表达和蛋白质翻译双重水平上,观察大鼠急性SCI后不同时间RhoA的表达情况。(2)剩余的大鼠于术后35天切取损伤段脊髓行HE染色检测脊髓组织形态学变化,观察SCI恢复情况。(3)在每个时间点对各组实验动物SCI后后肢运动功能恢复情况进行行为学评分(BBB评分法)。结果:(1)RT-PCR和Western印迹显示:RhoA mRNA和RhoA蛋白的表达在同时间点损伤组明显高于FTY720组和假手术组(P<0.05),于SCI后1天后表达增高,3天后显著升高,7天后达到高峰,14天、21天时仍高水平表达,但较前有所下降。FTY720组伤后1天、3天、7天的表达高于假手术组(P<0.05),差异有统计学意义;14天、21天时FTY720组与假手术组相比,差异无统计学意义(P>0.05);假手术组各时间点RhoA表达维持在较恒定水平。(2)HE染色显示:伤后35天,假手术组为正常脊髓组织,FTY720组损伤段脊髓组织形态病理改变较损伤组明显改善。(3)行为学BBB评分显示:假手术组术后BBB评分达到20分或21分。损伤组和FTY720组在SCI后均出现了典型的截瘫综合征,BBB评分均为0分。术后各时间点假手术组BBB评分明显高于损伤组和FTY720组;术后7天、14天、21天及35天FTY720组BBB评分高于损伤组(P<0.05),差异有统计学意义。结论:大鼠急性SCI后RhoA mRNA和RhoA蛋白的表达明显增高,且具有明显时间曲线;FTY720可能通过抑制大鼠急性SCI后RhoA的表达,改善损伤局部微环境,以达到减轻脊髓继发性损伤、促进脊髓神经功能及后肢运动功能的恢复。
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