论文部分内容阅读
为促进红麻抗虫转基因育种研究的发展，本研究以国家级重点推广的6个红麻高产优质抗病新品种为受体，采用花粉管通道法（即柱头滴加法和子房注射法）将抗虫（Bt）基因导入受体红麻品种。通过对重点受体品种福红952转基因后代四个世代田间观察抗虫效果和实验室内虫口喂养鉴定以及实验室内的PCR检测、ISSR分子标记检测和Southern分子杂交验证鉴定，获得了转基因研究的阶段性成果，并建立了红麻简捷高效转基因分子育种的有效途径与核心技术体系。试验结果如下： 1．Bt质粒制备与纯化：研究表明采用大量法制备含有抗虫（Bt）目的基因的质粒，经过纯化后其OD260/280在1.9-2.0即可用于转基因； 2．遗传转化效率：采用柱头滴加法和子房注射法得到的共处理红麻花470朵，当代结实率分别是68.8％和51.7％，后代少虫口分别为7.2％和24.5％，经PCR检测两种方法得到的总体转化效率为0.48％；获得具有抗虫特性的红麻品种福红952； 3．抗虫性室内虫口喂养鉴定：将抗虫的红麻叶片与非转基因的红麻叶片做对照，在室内进行抗虫喂养实验，喂食后第二天死亡率达65.5％，第4天后全部死亡，而非抗虫转基因红麻未表现明显的抗虫特性； 4．目的基因PCR分子检测：对抗虫转基因红麻福红952的四个不同世代的红麻叶片同时进行PCR分子检测，结果都检测到了目的基因的特征条带，其抗虫特性能稳定遗传； 5．抗虫特异稳定性ISSR分子标记检测：首次对抗虫转基因红麻进行ISSR分子标记检测，发现抗虫红麻与非转基因对照品种的谱带比较出现特异多态性；结果表明ISSR分子标记可用于抗虫转基因检测； 6．抗虫遗传稳定性分子杂交检验：采用地高辛Southern分子杂交对4个不同世代抗虫转基因红麻进行检测，四个遗传世代都检测到了三条目的条带，分别是约为2500bp、1500bp和680bp大小的片断。 7．抗虫转基因红麻福红952育成：从97个少虫口转基因红麻T2代中，在海南高密度虫口下田间自然鉴定，已获得三个具明显抗虫特性的转基因品系，并育成抗虫、高产、福红952抗虫转基因品系。