论文部分内容阅读
背景:胃癌是最常见的恶性肿瘤之一，在全球范围内位列肿瘤相关死因的第二位，东亚地区发病率尤其高。随着治疗手段的进步，虽然胃癌术后五年生存率有了一定的提高，但其总体治疗效果仍不乐观。胃癌的发生发展是一个内外多因素相互作用的过程，从分子水平上探索胃癌的发病机制，寻找胃癌进程相关的生物标记物及特异的治疗靶点是进一步改善胃癌预后的关键。 MicroRNA(miRNA)是近年来发现的一类进化保守的具有调控功能的非编码微小RNA，其大小约21～25个核苷酸，可通过与靶mRNA的3-UTR互补配对，抑制转录或促进靶mRNA的降解，有效地调控基因的表达。最近研究发现，miRNA可参与调控多种生命活动，如细胞增殖、分化、血管生成、新陈代谢等，在肿瘤的发生发展中起着致癌因子或抑癌因子的作用，成为当前研究的一个热点。 研究发现miR-187在多种肿瘤组织中存在差异性表达，参与肿瘤的进程，但miR-187与胃癌发生发展的关系如何报道尚少。 目的:探讨miR-187在胃癌中的表达情况及功能作用，期望为胃癌的早期诊断，靶向治疗及预后判断提供新的依据。 方法: 1、收集32例胃癌及其癌旁正常组织标本，采用茎环实时荧光定量PCR(RT-qPCR)方法检测miR-187在胃癌及其癌旁正常组织中的表达，并分析其表达水平与胃癌临床病理特征之间的关系; 2、通过化学方法合成miR-187模拟物(miR-187mimics)，分别以不同浓度、在不同时间点转染MGC-803胃癌细胞，上调miR-187表达，同时设未转染空白对照和转染阴性对照组; 3、CCK-8(Cell Counting Kit-8)增殖实验检测miR-187干预后胃癌细胞增殖的变化; 4、流式细胞术(FCM)检测miR-187干预后对胃癌细胞周期的影响; 5、通过生物信息学方法预测miR-187潜在的靶基因，荧光定量PCR予以初步检测验证。 结果: 1、在32例配对标本中，相对于癌旁正常组织，miR-187在胃癌组织中表达显著下调（P＜0.05）; miR-187的表达水平与胃癌分化程度(P＜0.05)及TNM分期(P＜0.05)相关，与性别、年龄、肿块位置、肿块大小、肿块侵润深度及淋巴结转移无关。 2、CCK-8增殖实验结果显示，miR-187过表达可抑制胃癌细胞的增殖。 3、FCM检测提示，miR-187过表达可改变胃癌细胞周期分布，细胞周期阻滞G0/G1期。 4、选取预测获得的miR-187潜在的靶基因，荧光定量PCR结果显示，miR-187能显著抑制各靶基因mRNA表达水平。 结论:我们的研究结果提示miR-187可能作为一种抑癌因素存在，涉及胃癌的发生发展过程，有望作为一个新的潜在生物标记物应用于胃癌的诊断及治疗。