污水处理优势微藻株的筛选及Desmodesmus sp.WC08扩培工艺与产物利用研究

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本文对分离自海南岛周边的30株潜力富油微藻及分离自污水的3株微藻进行污水处理能力测试。筛选得到一株优势微藻,并系统研究了影响其生长的主要因素。参照获得的优化条件及生长规律,实现了其在人工污水中的放大培养。并对产物藻粉的营养成分、不同极性萃取物的抗菌抗氧化活性、脂肪酸组成等方面进行了分析和考察。主要结果如下:(1)对污水水样进行测定,结果显示:污水中氮磷含量分别为29.66%、3.8%,接近污水处理厂二级处理出水的水质。水样中有四种金属离子超出生活饮用水标准。从污水水样中共分离得到3株微藻,根据显微形态、18SrDNA或ITS序列比对并结合系统发育树分析,分别鉴定为Chlorella lewinii LX01,Chlorella vulgaris LX02, Desmodesmus sp. LX03。(2)污水存活筛选结果显示:33株微藻中,共有5株在污水中生长良好,生物量超过0.4g/L。优势藻株复筛结果显示:Desmodesmus sp. WC08在污水中生物量为0.64g/L,油脂含量达40.50%,氮磷去除率分别为78.11%、89.48%。均优于其余四株优势藻株。其次Desmodesmus sp. WC08对污水中重金属离子的去除效果均高于50%。综合考虑将Desmodesmus sp. WC08作为本研究的主要研究藻株。(3)对影响Desmodesmussp.WC08生长的主要因素进行Plackett-Burman因子筛选,确定了 4个影响显著的因素,采用响应面法设计试验,结果表明:其油脂产率预测模型中四个因素的最适参数分别为初始OD值0.33、氮源10mmol/L、盐度16‰和初始pH 6.5。其最适的培养基组成为每升含0.6gCO(NH2)2,0.087gK2HPO4,0.0222gMgSO4·7H2O,0.00645gCaCl2·H2O, 0.006g 柠檬酸,0.00976mg 柠檬酸铁铵,0.0487gNa2CO3,0.001gEDTA·Na2,2.860gH3BO3,0.220gZnSO4·7H2O,1.810gMnCl2·4H2O,0.079gCuSO4·5H2O,0.049gCo(NO3)2·6H2O, 0.390g Na2MoO4·2H2O。最适接种量为初始OD680为0.33,最适培养液初始pH为6.8。参考最优条件并根据放大原理,实现了Desmodesmus sp.WC08在人工污水中800L管道式生物反应器的放大培养,结果显示:其生物量达到0.53g/L,油脂含量为29.17%,氮磷去除率分别为69.41%、89.97%。(4)测定结果表明:Desmodesmus sp.WC08中粗蛋白、多糖、油脂、灰分、粗纤维和色素分别占藻粉干重的28.75%、17.13%、38.98%、11.47%、14.68%和4.79%。氨基酸占干重的28.07%,必需氨基酸占氨基酸总量的39.15%。共测得9种脂肪酸,其中十八碳以内的短链脂肪酸占86.27%。油酸含量达到46.05%,不饱和脂肪酸占总脂肪酸的73.23%。抗菌抗氧化活性测试结果显示:正丁醇萃取物和石油醚萃取物具有较强的抗菌活性。不同萃取物对DPPH自由基的清除能力强弱顺序为:正丁醇相 > 乙酸乙酯相>乙醇浸膏>二氯甲烷相>水相 > 石油醚相。其中,正丁醇萃取物同时具有较高的抗菌、抗氧化活性。
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