论文部分内容阅读
目的：1.检测对照组与各实验组大鼠每日精子生成量(Daily Sperm Production，DSP)，研究砷对大鼠精子生成的影响；2.定性、定位、半定量检测对照组与各实验组大鼠各级生精细胞凋亡，以证实砷是否诱导生精细胞凋亡；3.定位和半定量检测对照组与各实验组大鼠睾丸生精细胞Bcl-2、Bax和Fas、FasL表达，观察Bcl-2、Bax及Fas、FasL在各级生精细胞中的表达，探讨砷的雄性生殖毒性与生精细胞Bcl-2、Bax及Fas、FasL的关系，从分子水平研究砷致生精细胞损害的作用机制以及途径，为进一步研究砷的男(雄)生殖毒理和贵州省地方性砷中毒的有效预防、控制、治疗提供理论基础。
方法：1.用0.375 mg/kg、0.75 mg/kg、1.5 mg/kg As2O3水溶液灌胃方式建立慢性砷中毒SD大鼠动物模型，分别设为低剂量组、中剂量组和高剂量组，同时设正常对照组；2.参考Blazak的方法检测对照组与各实验组SD大鼠DSP；3.通过末端转移酶介导的dUTP缺口末端标记法(TUNEL)，定性、定位、半定量检测对照组与各实验组SD大鼠各级生精细胞凋亡；4.免疫组织化学法对睾丸生精细胞Bcl-2、Bax及Fas、FasL表达进行定位和半定量检测，观察Bcl-2、Bax及Fas、FasL在对照组与各实验组大鼠各级生精细胞中的表达；5.对生精细胞凋亡与DSP、生精细胞Bcl-2、Bax及Fas、FasL表达的相关性进行分析。
结果：1.低剂量组SD大鼠DSP较对照组有所降低，但无显著性差异；中、高剂量组DSP明显降低，且随染毒剂量的增高而降低；2.对照组与各实验组SD大鼠睾丸生精小管中均有生精细胞凋亡，以精原细胞和精母细胞为主；低剂量组生精细胞凋亡指数(Apoptosis Index，AI)与对照组比较，无显著性差异；中、高剂量组生精细胞AI值明显升高，并随染毒剂量的增大而升高；3.对照组与各实验组SD大鼠睾丸精原细胞和精母细胞可检测到Bcl-2、Bax及Fas、FasL的表达，在支持细胞、间质细胞和精子中无表达；低剂量组生精细胞Bcl-2、Bax及Fas、FasL的表达与对照组比较无显著性差异，中、高剂量组生精细胞Bcl-2的表达明显降低，Bax、Fas、FasL的表达明显升高；4.DSP与生精细胞凋亡的相关性分析显示，二者间呈显著负相关；5．生精细胞凋亡与Bcl-2的表达之间呈显著负相关；生精细胞凋亡与Bax、Fas、FasL的表达之间呈显著正相关。
结论：1．慢性接触0.75 mg/kg和1.5mg/kg As2O3可通过诱导SD大鼠生精细胞凋亡增加，致每日精子生成量减少，二者存在剂量-效应关系；2．As2O3的雄性生殖细胞毒性机制之一可能是通过下调SD大鼠生精细胞Bcl-2的表达和上调Bax的表达，使细胞凋亡和存活信息平衡失调从而诱发生精细胞凋亡增加，导致精子生成量下降；3．As2O3的雄性生殖细胞毒性机制之一可能同时通过上调SD大鼠生精细胞Fas、 FasL的表达水平，启动细胞凋亡的细胞内死亡信号传递途径，诱发生精细胞凋亡增加，从而导致精子生成量下降；4．大鼠生精细胞Bcl-2、Bax及Fas、FasL的表达水平可作为监测As2O3致雄性生殖细胞毒性早期的分子生物学指标。