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卵巢癌是妇科恶性肿瘤之一。尽管铂类和紫杉烷类药物配伍的联合化疗以及最大限度的肿瘤细胞减灭术已大幅降低了卵巢癌的死亡率，但仍有超过75%的病人在初次诊断时即被确诊为晚期卵巢癌。目前标准的一线化疗方案是铂类和紫杉烷类药物的配伍。卵巢癌的化疗过程通常涉及3至6个周期的化疗。在初始治疗期间，大约80％的患者对化疗方案反应良好，但相当高比例的患者仍然会经历复发。对于铂类敏感的复发患者，他们可能对铂类药物的再次治疗有着积极地反应，无铂间隔越长，则对铂类二次治疗的积极反应期望越大。尽管如此，大多数患有晚期卵巢癌的病人最终会发展为铂类耐药。因此，卵巢癌的化疗耐药一直是妇科肿瘤学的一个临床难题。在蛋白组学的分析中，我们发现蛋白甲基转移酶染色质靶点1(chromatintargetofprotein-arginine-methyltransferase1,以下称CHTOP)在卵巢癌顺铂耐药细胞株中高表达。CHTOP是一种紧密结合脊椎动物间期细胞兼性异染色质的蛋白质，在卵巢癌中的作用尚不清楚。在本研究中，我们首次发现CHTOP高表达与卵巢癌病人较短的生存期密切相关。此外，敲低CHTOP可以通过抑制顺铂耐药和恶性卵巢癌细胞的干性特征而增加其对顺铂的敏感性，并削弱其迁移侵袭潜能。这项研究首次揭示了CHTOP在卵巢癌恶性表型中的作用，为基于CHTOP的卵巢癌靶向治疗方法提供了理论和实验依据。
第一部分基于LC-MS/MS的非标定量蛋白质组学揭示CHTOP为顺铂耐药卵巢癌细胞的生物标志物
目的：研究卵巢癌顺铂耐药细胞系及其亲代细胞蛋白表达差异以筛选潜在的卵巢癌顺铂耐药相关生物标志物。
方法：采用细胞毒实验检测卵巢癌顺铂耐药细胞系(A2780-cis和IGROV1-cis)及其亲代细胞(A2780和IGROV1)在不同浓度顺铂处理下的细胞增殖活性。采用基于LC-MS/MS的非标定量蛋白质组学鉴定细胞株间蛋白表达差异。采用免疫印迹和免疫荧光实验检测差异蛋白的表达水平。采用免疫组化检测人卵巢癌组织中标志物的表达水平。采用在线数据库分析标志物与预后的相关性。
结果：卵巢癌顺铂耐药细胞株显示出对顺铂毒性的明显耐药。蛋白组学揭示CHTOP是顺铂耐细药胞株中上调最为明显的蛋白。免疫印迹和免疫荧光的结果显示，相比于顺铂敏感的卵巢癌细胞，CHTOP在顺铂耐药的细胞中高表达。免疫组化结果显示，相比于正常卵巢组织，CHTOP在人卵巢癌组织中高表达。而且，CHTOP的高表达与较短的无病生存期密切相关。
结论：CHTOP可能是卵巢癌顺铂耐药的潜在生物标志物。
第二部分CHTOP通过调控顺铂耐药卵巢癌细胞的干性特征而调控其对顺铂的敏感性及转移潜能
目的：研究CHTOP在顺铂耐药卵巢癌细胞中的作用及相关机制。
方法：使用si-RNA敲低顺铂耐药卵巢癌细胞(A2780-cis和IGROV1-cis)的CHTOP蛋白表达。采用实时定量PCR(Quantitative real-Time PCR, qRT-PCR)检测CHTOPmRNA的表达水平。采用免疫荧光和免疫印迹分析检测CHTOP的蛋白表达水平。采用流式细胞术检测细胞早期凋亡。采用免疫印迹实验检测凋亡信号通路相关蛋白的表达水平。采用TUNEL实验检测细胞的晚期凋亡。采用裸鼠荷瘤实验评估抑制CHTOP对顺铂耐药卵巢癌细胞异种移植瘤顺铂敏感性的影响。采用划痕愈合实验检测细胞的迁移能力。采用基质胶侵袭实验检测细胞的侵袭能力。采用集落形成实验测定卵巢癌耐药细胞株的集落生成能力。采用球形生成实验检测细胞的体外成瘤能力。采用免疫印迹和免疫荧光实验检测癌症干细胞(Cancer stem cell，CSC)标志物的蛋白表达情况。采用CHTOP过表达质粒以进一步确证CHTOP对卵巢癌细胞顺铂耐药的调控作用。
结果：特异性si-RNA可以明显敲低CHTOPmRNA和蛋白的表达水平。同时，敲低CHTOP可以明显增加顺铂引起的卵巢癌耐药细胞的早期凋亡。免疫印迹分析结果显示，敲低CHTOP可以进一步增强顺铂诱导的凋亡信号通路激活。TUNEL实验结果显示，敲低CHTOP增加了顺铂诱导的DNA双链断裂及耐药细胞的晚期凋亡。裸鼠荷瘤实验结果表明，敲低CHTOP可以明显降低顺铂耐药卵巢癌细胞的体内成瘤能力，并增加其异种移植瘤对顺铂的敏感性。划痕愈合实验和基质胶侵袭实验结果显示，敲低CHTOP可以明显抑制顺铂耐药细胞的迁移侵袭能力。集落形成实验结果显示，敲低CHTOP可以显著抑制顺铂耐药细胞株的集落形成能力。球形生成实验结果显示，敲低CHTOP可以显著降低细胞的体外成瘤能力。免疫印迹和免疫荧光实验结果显示，敲低CHTOP可以明显降低顺铂耐药卵巢癌细胞CSC标志物的蛋白表达。相反，过表达CHTOP可以明显增强顺铂敏感细胞的干性特征，并降低其对顺铂的敏感性。
结论:CHTOP可以通过调控顺铂耐药卵巢癌细胞的干性特征而调控其对顺铂的敏感性及转移潜能。
第三部分CHTOP调控恶性卵巢癌细胞的干性特征、转移潜能及顺铂敏感性
目的：进一步确证CHTOP对卵巢癌细胞恶性表型的调控作用。
方法：采用免疫印迹和免疫荧光实验检测CHTOP在普通卵巢癌细胞株(IGROV1)和恶性卵巢细胞株(OV-90和SK-OV-3)中的蛋白表达差异。采用特异性si-RNA敲低CHTOP在恶性卵巢癌细胞株中的蛋白表达。采用球形生成实验检测细胞的体外成瘤能力。采用免疫印迹实验检测恶性卵巢癌细胞CSC标志物的蛋白表达情况。分别采用划痕愈合实验和基质胶侵袭实验检测细胞的迁移和侵袭能力。采用集落形成实验测定细胞的化疗敏感性。采用流式细胞术检测细胞早期凋亡。采用免疫印迹实验检测凋亡信号通路相关蛋白的表达水平。采用TUNEL实验检测细胞的晚期凋亡。
结果：与IGROV1相比，CHTOP在恶性卵巢癌细胞株中高表达。且这些恶性细胞株均具有更强的干性特征、侵袭迁移能力和顺铂耐药潜能。球形实验显示，敲低CHTOP可以显著降低恶性卵巢癌细胞的体外成瘤能力。免疫印迹实验结果显示，敲低CHTOP可以明显降低恶性卵巢癌细胞CSC标志物的蛋白表达。划痕愈合实验和基质胶侵袭实验的结果显示，敲低CHTOP可以明显抑制恶性卵巢癌细胞的迁移侵袭能力。集落形成实验结果显示，敲低CHTOP可以明显增加恶性卵巢癌细胞的顺铂敏感性。流式细胞实验结果显示，敲低CHTOP可以明显增加顺铂诱导的恶性卵巢癌细胞的早期凋亡。免疫印迹分析结果显示，敲低CHTOP可以进一步增强顺铂诱导的细胞凋亡信号通路激活。TUNEL实验的结果显示，敲低CHTOP可以进一步增加顺铂诱导的DNA双链断裂及恶性卵巢癌细胞的晚期凋亡。
结论:CHTOP在卵巢癌细胞恶性表型的调控中发挥着重要作用。
第一部分基于LC-MS/MS的非标定量蛋白质组学揭示CHTOP为顺铂耐药卵巢癌细胞的生物标志物
目的：研究卵巢癌顺铂耐药细胞系及其亲代细胞蛋白表达差异以筛选潜在的卵巢癌顺铂耐药相关生物标志物。
方法：采用细胞毒实验检测卵巢癌顺铂耐药细胞系(A2780-cis和IGROV1-cis)及其亲代细胞(A2780和IGROV1)在不同浓度顺铂处理下的细胞增殖活性。采用基于LC-MS/MS的非标定量蛋白质组学鉴定细胞株间蛋白表达差异。采用免疫印迹和免疫荧光实验检测差异蛋白的表达水平。采用免疫组化检测人卵巢癌组织中标志物的表达水平。采用在线数据库分析标志物与预后的相关性。
结果：卵巢癌顺铂耐药细胞株显示出对顺铂毒性的明显耐药。蛋白组学揭示CHTOP是顺铂耐细药胞株中上调最为明显的蛋白。免疫印迹和免疫荧光的结果显示，相比于顺铂敏感的卵巢癌细胞，CHTOP在顺铂耐药的细胞中高表达。免疫组化结果显示，相比于正常卵巢组织，CHTOP在人卵巢癌组织中高表达。而且，CHTOP的高表达与较短的无病生存期密切相关。
结论：CHTOP可能是卵巢癌顺铂耐药的潜在生物标志物。
第二部分CHTOP通过调控顺铂耐药卵巢癌细胞的干性特征而调控其对顺铂的敏感性及转移潜能
目的：研究CHTOP在顺铂耐药卵巢癌细胞中的作用及相关机制。
方法：使用si-RNA敲低顺铂耐药卵巢癌细胞(A2780-cis和IGROV1-cis)的CHTOP蛋白表达。采用实时定量PCR(Quantitative real-Time PCR, qRT-PCR)检测CHTOPmRNA的表达水平。采用免疫荧光和免疫印迹分析检测CHTOP的蛋白表达水平。采用流式细胞术检测细胞早期凋亡。采用免疫印迹实验检测凋亡信号通路相关蛋白的表达水平。采用TUNEL实验检测细胞的晚期凋亡。采用裸鼠荷瘤实验评估抑制CHTOP对顺铂耐药卵巢癌细胞异种移植瘤顺铂敏感性的影响。采用划痕愈合实验检测细胞的迁移能力。采用基质胶侵袭实验检测细胞的侵袭能力。采用集落形成实验测定卵巢癌耐药细胞株的集落生成能力。采用球形生成实验检测细胞的体外成瘤能力。采用免疫印迹和免疫荧光实验检测癌症干细胞(Cancer stem cell，CSC)标志物的蛋白表达情况。采用CHTOP过表达质粒以进一步确证CHTOP对卵巢癌细胞顺铂耐药的调控作用。
结果：特异性si-RNA可以明显敲低CHTOPmRNA和蛋白的表达水平。同时，敲低CHTOP可以明显增加顺铂引起的卵巢癌耐药细胞的早期凋亡。免疫印迹分析结果显示，敲低CHTOP可以进一步增强顺铂诱导的凋亡信号通路激活。TUNEL实验结果显示，敲低CHTOP增加了顺铂诱导的DNA双链断裂及耐药细胞的晚期凋亡。裸鼠荷瘤实验结果表明，敲低CHTOP可以明显降低顺铂耐药卵巢癌细胞的体内成瘤能力，并增加其异种移植瘤对顺铂的敏感性。划痕愈合实验和基质胶侵袭实验结果显示，敲低CHTOP可以明显抑制顺铂耐药细胞的迁移侵袭能力。集落形成实验结果显示，敲低CHTOP可以显著抑制顺铂耐药细胞株的集落形成能力。球形生成实验结果显示，敲低CHTOP可以显著降低细胞的体外成瘤能力。免疫印迹和免疫荧光实验结果显示，敲低CHTOP可以明显降低顺铂耐药卵巢癌细胞CSC标志物的蛋白表达。相反，过表达CHTOP可以明显增强顺铂敏感细胞的干性特征，并降低其对顺铂的敏感性。
结论:CHTOP可以通过调控顺铂耐药卵巢癌细胞的干性特征而调控其对顺铂的敏感性及转移潜能。
第三部分CHTOP调控恶性卵巢癌细胞的干性特征、转移潜能及顺铂敏感性
目的：进一步确证CHTOP对卵巢癌细胞恶性表型的调控作用。
方法：采用免疫印迹和免疫荧光实验检测CHTOP在普通卵巢癌细胞株(IGROV1)和恶性卵巢细胞株(OV-90和SK-OV-3)中的蛋白表达差异。采用特异性si-RNA敲低CHTOP在恶性卵巢癌细胞株中的蛋白表达。采用球形生成实验检测细胞的体外成瘤能力。采用免疫印迹实验检测恶性卵巢癌细胞CSC标志物的蛋白表达情况。分别采用划痕愈合实验和基质胶侵袭实验检测细胞的迁移和侵袭能力。采用集落形成实验测定细胞的化疗敏感性。采用流式细胞术检测细胞早期凋亡。采用免疫印迹实验检测凋亡信号通路相关蛋白的表达水平。采用TUNEL实验检测细胞的晚期凋亡。
结果：与IGROV1相比，CHTOP在恶性卵巢癌细胞株中高表达。且这些恶性细胞株均具有更强的干性特征、侵袭迁移能力和顺铂耐药潜能。球形实验显示，敲低CHTOP可以显著降低恶性卵巢癌细胞的体外成瘤能力。免疫印迹实验结果显示，敲低CHTOP可以明显降低恶性卵巢癌细胞CSC标志物的蛋白表达。划痕愈合实验和基质胶侵袭实验的结果显示，敲低CHTOP可以明显抑制恶性卵巢癌细胞的迁移侵袭能力。集落形成实验结果显示，敲低CHTOP可以明显增加恶性卵巢癌细胞的顺铂敏感性。流式细胞实验结果显示，敲低CHTOP可以明显增加顺铂诱导的恶性卵巢癌细胞的早期凋亡。免疫印迹分析结果显示，敲低CHTOP可以进一步增强顺铂诱导的细胞凋亡信号通路激活。TUNEL实验的结果显示，敲低CHTOP可以进一步增加顺铂诱导的DNA双链断裂及恶性卵巢癌细胞的晚期凋亡。
结论:CHTOP在卵巢癌细胞恶性表型的调控中发挥着重要作用。