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目的：小胶质细胞在神经炎症发挥重要作用，探讨焦亡是否参与了胆红素诱导原代培养大鼠小胶质细胞的损伤，并进一步探讨小胶质细胞亚型的失衡在胆红素神经毒性中的作用。
方法：原代培养小胶质细胞，随机分为胆红素组、胆红素+VX-765组、对照组。改良MTT检测胆红素刺激小胶质细胞存活率，Westernblot检测焦亡相关蛋白caspase-1(半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-1)、GSDMD(gasdermin D)表达，乳酸脱氢酶(LDH)释放实验检测细胞毒性作用，不同分子量染料EtBr/EthD2(EtBr MW 394 Da，EthD2 MW 1293 Da)染色检测细胞质膜孔大小，ELISA检测细胞培养上清中炎症因子IL-1β、IL-18、TNF-α、IL-6、IL-10水平，实时荧光定量PCR检测小胶质细胞表型CD86(M1标记物)和Arg-1(M2标记物)mRNA表达，吞噬试验评估小胶质细胞吞噬功能，免疫荧光方法测定CD86/Arg-1、iNOS、NF-κBp65表达，EMSA检测NF-κB的活化。
结果：胆红素刺激小胶质细胞后，0.5h时活化型caspase-1表达较对照组明显增加(P=0.0335)，6h时活化型GSDMD表达明显高于对照组(P=0.0036)；LDH释放率呈时间依赖性上升，小分子染料EtBr通过细胞质膜阳性率为(62.25±12.97)%，明显高于对照组(P＜0.001)，大分子染料EthD2通过率无显著差异(P=0.2995)；进一步分析小胶质细胞亚型变化，胆红素诱导下，引起小胶质细胞CD86和Arg-1的明显表达，在胆红素刺激早期，主要以M2相关的吞噬功能和抗炎因子IL-10占主导。胆红素的持续刺激，形成炎症性微环境，导致向M1小胶质细胞转变，引起iNOS表达和促炎因子(IL-1β、TNF-α和IL-6)释放。同时，NF-κB入核活化，上调IL-1β、TNF-α、IL-6等炎症反应相关的靶基因转录水平。然而，VX-765(caspase-1抑制物)减少了小胶质细胞活化，下调CD86，减少活化型GSDMD表达、EtBr通过率，限制炎症靶基因的转录和LDH、TNF-α、IL-6、IL-1β的释放，均有显著性差异(P＜0.05)，同时也上调了Arg-1的表达，提高细胞存活率(P＜0.05)。
结论：焦亡在胆红素诱导原代培养小胶质细胞神经毒性中具有重要作用，抑制焦亡，可限制炎症性微环境，影响小胶质细胞亚群分化，抑制胆红素神经损伤。
方法：原代培养小胶质细胞，随机分为胆红素组、胆红素+VX-765组、对照组。改良MTT检测胆红素刺激小胶质细胞存活率，Westernblot检测焦亡相关蛋白caspase-1(半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-1)、GSDMD(gasdermin D)表达，乳酸脱氢酶(LDH)释放实验检测细胞毒性作用，不同分子量染料EtBr/EthD2(EtBr MW 394 Da，EthD2 MW 1293 Da)染色检测细胞质膜孔大小，ELISA检测细胞培养上清中炎症因子IL-1β、IL-18、TNF-α、IL-6、IL-10水平，实时荧光定量PCR检测小胶质细胞表型CD86(M1标记物)和Arg-1(M2标记物)mRNA表达，吞噬试验评估小胶质细胞吞噬功能，免疫荧光方法测定CD86/Arg-1、iNOS、NF-κBp65表达，EMSA检测NF-κB的活化。
结果：胆红素刺激小胶质细胞后，0.5h时活化型caspase-1表达较对照组明显增加(P=0.0335)，6h时活化型GSDMD表达明显高于对照组(P=0.0036)；LDH释放率呈时间依赖性上升，小分子染料EtBr通过细胞质膜阳性率为(62.25±12.97)%，明显高于对照组(P＜0.001)，大分子染料EthD2通过率无显著差异(P=0.2995)；进一步分析小胶质细胞亚型变化，胆红素诱导下，引起小胶质细胞CD86和Arg-1的明显表达，在胆红素刺激早期，主要以M2相关的吞噬功能和抗炎因子IL-10占主导。胆红素的持续刺激，形成炎症性微环境，导致向M1小胶质细胞转变，引起iNOS表达和促炎因子(IL-1β、TNF-α和IL-6)释放。同时，NF-κB入核活化，上调IL-1β、TNF-α、IL-6等炎症反应相关的靶基因转录水平。然而，VX-765(caspase-1抑制物)减少了小胶质细胞活化，下调CD86，减少活化型GSDMD表达、EtBr通过率，限制炎症靶基因的转录和LDH、TNF-α、IL-6、IL-1β的释放，均有显著性差异(P＜0.05)，同时也上调了Arg-1的表达，提高细胞存活率(P＜0.05)。
结论：焦亡在胆红素诱导原代培养小胶质细胞神经毒性中具有重要作用，抑制焦亡，可限制炎症性微环境，影响小胶质细胞亚群分化，抑制胆红素神经损伤。