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目的: 对本研究所合成的13种新型化合物,通过放射性配体受体结合实验,筛选出对5-羟色胺1A受体(5-HT1AR)和5-羟色胺转运蛋白(SERT)都具有高结合活性的化合物;并对优选的双重高亲合活性化合物,在多种动物模型上评价其抗抑郁作用;同时还在多种学习记忆动物模型上评价其改善认知的效能;这些为进一步深入研究提供实验依据。 方法: 1.通过质粒扩增、脂质体转染法培养瞬时表达SERT的HEK-293细胞,并常规培养稳定表达5-HT1A受体的PC-12细胞,建立制备大量相关蛋白的稳定方法; 2.应用放射配基受体结合实验,在本所合成的系列新型化合物中,筛选对SERT和5-HT1A受体都具有高亲合力的小分子化合物;对优选化合物YL-0919配体结合特征进一步评价;继而利用海马突触体5-HT重吸收功能抑制实验,检测其对5-HT重吸收功能的抑制作用,离体水平验证其生物活性。 3.采用多种抑郁动物模型(小鼠悬尾实验、小鼠强迫游泳实验、大鼠获得性无助实验和大鼠嗅球切除实验)对优选化合物YL-0919进行抗抑郁作用的评价。 4.采用多种学习记忆动物模型(小鼠物体识别实验、小鼠Morris水迷宫实验和小鼠跳台实验)对优选化合物YL-0919进行改善认知活性的评价。 结果: 1.建立了SERT和5-HT1A受体蛋白制备和离体水平活性化合物筛选的方法,技术稳定可靠。 2.放射性配体受体结合实验筛选表明,在13种待测化合物中,YL-0919具有较强的双重结合活性,与SERT结合的Ki值为5.38±0.27nM,与5-HT1A受体结合的Ki值为0.44±0.32nM。同时突触体重吸收功能抑制实验结果表明,YL-0919对大鼠海马粗制突触体的5-HT重摄取功能具有显著抑制作用,IC50值为8.51±0.23nM。以上离体实验结果证实YL-0919对这两种受体都具有高亲和活性。 3.①单次灌胃给予YL-0919(0.625-2.5mg/kg),可以显著缩短小鼠悬尾不动时间(P<0.05或P<0.01);②单次灌胃给予YL-0919(0.625mg/kg,1.25mg/kg),均可以显著缩短小鼠强迫游泳不动时间(均为P<0.01);③连续灌胃给予YL-0919(0.625mg/kg/天,1.25mg/kg/天),均可以使获得性无助大鼠的逃避失败次数显著减少(分别为P<0.05或P<0.001);④连续灌胃给予YL-0919(2.5mg/kg/天)也可以显著逆转大鼠嗅球切除导致的开场运动次数的增加(P<0.01);⑤连续灌胃给予YL-0919(1.25mg/kg/天,2.5mg/kg/天)也可以显著逆转大鼠嗅球切除诱导的逃避反应次数的增加(P<0.01);⑥以上行为效应与经典抗抑郁药物丙咪嗪或氟西汀一致。并且在上述剂量范围内,YL-0919不影响小鼠的自发活动,提示YL-0919具有抗抑郁活性。 4.①连续灌胃给予YL-0919(0.625mg/kg/天,2.5mg/kg/天)可以显著升高小鼠物体识别实验模型上的识别指数(P<0.05或P<0.01);②在Morris水迷宫实验动物模型上,连续灌胃给予YL-0919(2.5mg/kg/天,5mg/kg/天),可以显著增加小鼠在目标象限停留时间和目标象限穿越次数(均为P<0.05);③在跳台实验动物模型上,连续灌胃给予YL-0919(1.25mg/kg/天,2.5mg/kg/天)可以使记忆障碍小鼠的跳台潜伏期显著延长(P<0.01),并使错误跳台次数显著减少(P<0.01);④以上行为效应均与经典改善认知药物多奈哌齐 一致,提示YL-0919具有促进认知的活性。 结论: 1.经过放射性配体受体结合实验筛选,发现YL-0919与SERT和5-HT1A受体蛋白均具有较高的结合活性,并且具有较强的5-HT重摄取的抑制功能,可能是具有SERT和5-HT1A受体双重调节作用的优选化合物; 2.灌胃给予YL-0919(0.625-1.25mg/kg)在多种抑郁动物模型上表现出显著抗抑郁的作用; 3.灌胃给予YL-0919(1.25-2.5mg/kg)在多种动物学习记忆模型上表现出显著改善认知的作用。 4.本研究为多靶点抗抑郁、促认知新药的研究提供了可靠的实验依据。