脱细胞纤维环基质对骨髓间充质干细胞生长和分化潜能的影响

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目的:制备脱细胞纤维环基质(decellularized annulus fibrosus matrix, DAFM)材料,并探讨DAFM材料对骨髓间充质干细胞(bone marrow-derived mesenchymal stemcells, BMSCs)的生长和分化潜能的影响。方法:获取猪的纤维环组织并剪碎,依次用胰酶、核酸酶、Triton X-100进行消化处理,最后用0.5M醋酸溶液溶解,得到脱细胞纤维环基质溶液。以该溶液制备DAFM膜,通过DAPI染色观察脱细胞效果,扫描电镜观察DAFM膜的微观结构。取2月龄的新西兰大白兔,通过全骨髓贴壁培养法提取BMSCs。取第3代BMSCs分别接种到DAFM膜和普通培养板上进行培养,观察细胞形态,通过MTT实验检测BMSCs在DAFM膜和普通培养板上的增殖能力。通过成脂、成骨、成软骨诱导分化实验检测材料对细胞分化潜能的影响。结果:制备了可溶性DAFM,DAFM膜材料经DAPI染色呈阴性,显示细胞已被彻底脱除。DAFM膜表面粗糙,并保留大量微胶原纤维。所分离纯化的BMSCs表达干细胞标志物Oct-4和nucleostemin,能向脂肪、骨、软骨细胞分化。BMSCs在DAFM膜和普通培养板上都能很好的生长。细胞在DAFM膜上和普通培养板上经过成脂、成骨、成软骨诱导分化后,通过Oil Red O、Alizarin Red、Safranin O染色证明在DAFM膜上生长的细胞所形成的脂滴、钙结节、软骨基质粘多糖较普通培养板上的明显增多。结论:成功制备了DAFM材料,其中胶原的微纤维结构被较完整地保留。用于BMSCs培养时,DAFM材料可良好的保持BMSCs细胞形态,促进细胞生长,增强干细胞分化潜能。
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