【摘 要】
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目的:探究胸苷激酶1（thymidine kinase 1,TK1）对非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer,NSCLC）A549/DDP细胞对顺铂药物敏感性的影响,以及是否可能通过DNA损伤修复机制影响NSCLC A549/DDP细胞对顺铂药物敏感性。方法:利用过表达及干扰TK1的慢病毒转染A549/DDP细胞,构建A549/DDP细胞的TK1过表达稳定转染细胞株（o
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目的:探究胸苷激酶1（thymidine kinase 1,TK1）对非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer,NSCLC）A549/DDP细胞对顺铂药物敏感性的影响,以及是否可能通过DNA损伤修复机制影响NSCLC A549/DDP细胞对顺铂药物敏感性。方法:利用过表达及干扰TK1的慢病毒转染A549/DDP细胞,构建A549/DDP细胞的TK1过表达稳定转染细胞株（oe-TK1）、过表达对照组（oe-NC）、干扰稳定细胞株（sh-TK1）、干扰对照组（sh-NC）。通过MTT实验、平板克隆形成实验检测TK1对细胞增殖的影响,对顺铂耐药IC50的影响;采用Western Blot检测TK1对耐药相关蛋白多药耐药相关蛋白1（multidrug resistance related protein 1,MRP1）、多药耐药基因1（Multidrug resistance gene 1,MDR1）、肺癌耐药相关蛋白1（lung cancer resistance related protein 1,LRP1）以及磷酸化组蛋白H2AX（phosphorylated H2A histone family member x,γ-H2AX）表达的影响。结果:成功构建TK1过表达、干扰稳转细胞株。MTT结果显示,oe-TK1的细胞增殖能力明显高于oe-NC组(P24h=0.0014;P48h=0.0157;P72h=0.0122),差异均具有统计学意义。而sh-TK1组的细胞增殖能力显著低于sh-NC组(P24h=0.0041;P72h=0.0037),差异具有统计学意义。平板克隆形成实验结果显示,oe-TK1组的克隆形成数量明显大于oe-NC组（P＜0.0001）,差异具有统计学意义。IC50检测结果显示,oe-TK1组的IC50显著大于oe-NC组（30.20μg/m L vs 20.92μg/m L）,而sh-TK1组的IC50显著小于sh-NC组（25.46μg/m L vs 38.33μg/m L）。Western Blot结果显示,oe-TK1组耐药蛋白LRP1及MDR1的表达量均显著高于oe-NC组(PLRP1=0.0199;PMDR1=0.0021),而DNA损伤标记蛋白γ-H2AX的表达较oe-NC组显著下降（P＜0.001）。在sh-TK1组中,MRP1、MDR1及LRP1蛋白表达量低于sh-NC组(PMRP1=0.0373;PMDR1=0.0023;PLRP1=0.0191),而γ-H2AX的表达高于sh-NC组（P＜0.0001）。结论:TK1可增强A549/DDP细胞的增殖能力及对顺铂的耐药性,且可能通过DNA修复机制来发挥作用。
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