目的：在从噬菌体抗体库中克隆了人抗地高辛单链抗体(single-chainvariablefragmentofanti-Dig，，ADAScFv)并成功地实现了其在大肠杆菌(escherichia,coliEcoli)BH2151中的高效分泌型表达的基础上，探索人ADAScFv的纯化条件，为制备高纯度的、适于临床诊断及治疗地高辛中毒的人源单链抗体提供实验基础。 方法：①将含有p3MH-ADAScFv表达载体的E.coli菌株HB2151培养，采用IPTG诱导，使人ADAScFv分泌表达于培养基中，制备含有目的蛋白的培养基上清；②分别采用饱和度为0～20％、20％～30％、30％～50％的硫酸铵对培养基上清中的目的蛋白进行浓缩及初步分离；③采用阴离子交换层析对硫酸铵分级盐析回收样品进行纯化，探索对ADAScFv进一步纯化的条件，包括缓冲液的pH、洗脱液中不同离子强度、温度等对纯化效果的影响；④采用SDS-PAGE及ELISA法分别检测硫酸铵分级盐析及阴离子交换层析回收样品的纯度及抗原结合活性。 结果：①SDS-PAGE显示：0～20％饱和度硫酸铵盐析回收样品中含有大量的杂蛋白，仅含有微量目的蛋白，30％～50％中含有一约36KD的条带，其分子量与预期值相符，且回收率最高，与目的蛋白分子量相近的杂蛋白明显减少；采用pH9.0的平衡缓冲液平衡层析柱及稀释样品后，0.2mo1/LNaCl、pH9.0的缓冲液洗脱回收样品之目的蛋白的纯度及回收率均较高；②ELISA检测结果显示：30％～50％饱和度硫酸铵盐析及阴离子交换层析回收样品均具有良好的抗原结合活性。 结论：①对在E.coli分泌型表达的人ADAScFv进行硫酸铵分级盐析，既可使其浓缩又能达到初步分离纯化的目的，为进一步采用其他方法制备高纯度的产品奠定了基础；②采用阴离子交换层析法可制备纯度较高的人ADAScFv，但尚需将高效蛋白纯化系统与阴离子交换层析法进行有机结合，可进一步提高纯度、回收率及工作效率。