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目的:探讨NK细胞在URSA发病中的机制;阐释补肾固冲经验方加味寿胎丸通过调节NK细胞功能与亚群分化状态诱导母胎免疫耐受治疗URSA的作用机制,为中药治疗URSA提供针对性的治疗靶点及理论依据。方法:本研究分为三部分。第一部分为理论研究,系统阐述中医学对于URSA病因病机的认识,中医学及西医学对URSA的治疗,NK细胞与母胎免疫耐受状态的关系。第二部分为实验研究,通过流式细胞术、ELISA法、RT-PCR技术等现代分子生物学技术全面研究URSA妊娠丢失组NK细胞的活性、亚群分化状态、细胞因子分泌水平及mRNA转录水平,并与健康早孕妇女进行比较;观察补肾固冲法治疗URSA患者前后NK细胞活性与功能的变化;通过化学发光法测定URSA妊娠组治疗后血清E2、P、β-HCG水平并与健康早孕组作比较;对URSA患者血清E2、P、β-HCG水平与NK细胞受体NKG2D、NKG2A表达水平作相关性分析。第三部分为讨论,深入探讨NK细胞在URSA发病中的作用,阐释补肾固冲法通过调节NK细胞功能与亚群分化状态治疗URSA的作用机制。结果:1.与HEP组相比,URSA妊娠丢失组pNK细胞活化性受体NKG2D呈高水平表达(P<0.01),抑制性受体NKG2A呈低水平表达(P<0.01)。URSA妊娠丢失组CD3-CD56+TNF-α+、CD3-CD56+IFN-γ+细胞亚群分化比例明显高于HEP组(P<0.01);CD3-CD56+IL-4+、CD3-CD56+IL-10+细胞亚群分化比例明显低于 HEP组(P<0.01)。URSA妊娠丢失组pNK细胞分泌的TNF-α、IFN-γ及其mRNA转录水平明显高于HEP组(P<0.01);IL-4、IL-10及其mRNA转录水平明显低于HEP组(P<0.01)。2.URSA妊娠组患者经中药补肾固冲法治疗后,血清E2、P、β-HCG水平与同期HEP组比较差异无统计学意义(P>0.05)。3.URSA妊娠组治疗后pNK细胞NKG2D表达水平明显低于治疗前(P<0.01),NKG2A表达水平明显高于治疗前(P<0.01);CD3-CD56+TNF-α+、CD3-CD56+IFN-γ+细胞亚群比例明显低于治疗前(P<0.01);CD3-CD56+IL-4+、CD3-CD56+IL-10+细胞亚群比例明显高于治疗前(P<0.01);pNK细胞分泌的TNF-α、IFN-γ及其mRNA转录水平与治疗前分别比较均明显下降(P<0.01);IL-4、IL-10及其mRNA转录水平与治疗前分别比较均明显升高(P<0.01)。4.URSA妊娠丢失组dNK细胞分泌的细胞因子TNF-α、IFN-ymRNA转录水平均明显高于HEP组(P<0.01);IL-4、IL-1OmRNA转录水平均明显低于HEP组(P<0.01)。HEP组dNK细胞分泌的细胞因子TNF-amRNA转录水平高于pNK细胞(P<0.05);IFN-γmRNA转录水平与pNK细胞比较无差异(P>0.05);IL-4及IL-10mRNA转录水平均明显高于pNK细胞(P<0.01)。URSA妊娠丢失组dNK细胞分泌的细胞因子TNF-α、IL-4、IL-10mRNA转录水平均明显高于pNK细胞(P<0.01);IFN-ymRNA转录水平与pNK细胞比较无差异(P>0.05)。5.URSA妊娠组血清E2、P、β-HCG水平与pNK细胞活化性受体NKG2D的表达有直线相关关系,呈负相关;与pNK细胞抑制性受体NKG2A的表达有直线相关关系,呈正相关。结论:1.NK细胞的活性、亚群分化状态、细胞因子的分泌水平及其mRNA转录水平参与了URSA的发病。2.中药补肾固冲法是治疗肾虚型URSA的基本方法,加味寿胎丸是治疗肾虚型URSA的有效方剂。3.补肾固冲经验方加味寿胎丸通过下调NK细胞受体NKG2D的表达,上调NKG2A的表达,抑制母胎间免疫排斥;调节CD3-CD56+TNF-α+、CD3-CD56+IFN-γ+、CD3-CD56+IL-4+、CD3-CD56+IL-10+NK细胞亚群的表达比例,下调Th1型细胞因子TNF-α、IFN-y的分泌水平及其相应mRNA转录水平,上调Th2型细胞因子IL-4、IL-10的分泌水平及其相应mRNA转录水平诱导免疫耐受;分别从蛋白水平及基因水平证明了补肾固冲法治疗肾虚型URSA的有效性。4.dNK细胞分泌细胞因子TNF-α、IFN-γ、IL-4、IL-10mRNA转录水平与pNK细胞趋势一致,较高的TNF-α、IFN-γ分泌水平及其mRNA转录水平,较低的IL-4、IL-10分泌水平及其mRNA转录水平向Th1样作用漂移,介导母胎免疫排斥,参与URSA的发病。NK细胞介导妊娠免疫耐受状态可能主要通过调节母胎界面的免疫功能来实现;外周血中的NK细胞在一定程度上反映了母胎界面的免疫学特征,通过外周血NK细胞的检测可以间接了解蜕膜局部的免疫状态。5.URSA患者血清E2、P、β-HCG水平与NK细胞受体NKG2D、NKG2A表达有直线相关关系,分别呈负相关和正相关,提示补肾固冲法能通过调节URSA患者NK细胞的活化状态调控妊娠相关激素E2、P、β-HCG的分泌。