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[目的]研究凋亡诱导因子(AIF)信号通路在庆大霉素耳肾毒性中的作用,并基于此作用探讨川芎嗪对庆大霉素耳肾毒性的干预机制,从而进一步阐述耳肾病理相关性,丰富肾主耳学说。[方法]筛选健康、耳廓反射正常的Sprague Dewle(SD)大鼠40只,适应性喂养1周后随机分成4组:①庆大霉素造模组(GM组)、②川芎嗪干预组(GM+TMP组)、③川芎嗪组(TMP组)、④生理盐水组(空白对照组)。GM组:肌注硫酸庆大霉素120mg·kg-1·d-1;GM+TMP组:肌注硫酸庆大霉素120 mg·kg-1·d-1及腹腔注射盐酸川芎嗪30mg·kg-1·d-1;TMP组:腹腔注射盐酸川芎嗪30mg·kg-1·d-1;空白对照组:肌注与GM组等量的生理盐水。每日根据体重调整给药剂量。所有组大鼠均连续给药13天,每组大鼠首次用药前1天及用药13天后均采用短音听性脑干反应(click ABR)测试进行客观听力检查、取血检测尿素氮(BUN)和肌酐水平(CREA),实验结束后所有大鼠断头处死,收集耳蜗、肾标本。进行HE染色,在光镜下观察耳蜗和肾的病理变化。Western blot法检测耳蜗、肾组织AIF蛋白表达量,并进行相关性分析。[结果]①客观听力检查结果:见表1、图1,采用click ABR检测方法,用药前四组大鼠听力阈值分别为:GM 组(3.25±5.05 dB nHL)、GM+TMP 组(4.95±3.06 dB nHL)、TMP组(5.27±3.15 dB nHL)、空白对照组(3.45±4.36 dB nHL),各组听阈无显著性差异(P>0.05)。用药后:GM 组(26.25±14.43 dB nHL)、GM+TMP 组(14.38±26.65 dB nHL)、TMP 组(3.33±6.83 dB nHL)、空白对照组(5.00±5.27 dB nHL),GM 组的ABR阈值显著性升高,与用药前及用药后各组比,差异均具有统计学意义(P<0.05);GM组的ABR阈值与GM+TMP组的ABR阈值相比差异也有一定统计学意义(P>0.05),但相对于另外两组而言,不是那么明显;TMP组的ABR阈值与空白对照组的ABR阈值相比差异无统计学意义(P>0.05)。②血清BUN、CREA结果:见表2、图2,用药后GM组血清BUN、CREA值显著升高,相比较于其他三组而言,差异均具有统计学意义(p<0.05),其中,GM+TMP组也有一定升高,但较GM组较低;用药后GM+TMP组、TMP组和空白对照组三组之间同样彼此之间有一定差异,但差异不具有统计学意义(p>0.05)。③形态学结果:见附图2,耳蜗切片HE染色显示,空白对照组耳蜗组织形态正常;GM组Corti氏器严重变形,外毛细胞(OHC)肿胀、变形,螺旋神经节内有大量细胞缺失,出现空泡样变;GM+TMP组Corti氏器毛细胞散在缺失,螺旋神经节形态结构均有不同程度病理改变、细胞数量有所减少,但均较GM组损伤轻;TMP组Corti氏器中的毛细胞和螺旋神经节上的细胞其形态结构均基本完整、变化较轻。肾标本显示空白对照组和TMP组肾小管结构完整,肾小管间排列紧密;GM组大鼠肾小管上皮细胞水肿,肾小管扩张,有蛋白管型和细胞管型,GM+TMP组情况好于GM组,偶见少量蛋白管型。④Western blot法测蛋白表达结果:见表3-4、图3-10。胞浆水平,耳蜗AIF蛋白分布程度依次为:空白对照组>TMP组≈GM+TMP组>GM组。与空白对照组相比,GM组耳蜗AIF蛋白表达变化较大,其他三组与其相比均有统计学差异(p<0.05)。TMP组和GM+TMP组耳蜗AIF蛋白表达量差别不大,虽都较空白对照组要小,但三组彼此之间无统计学差异(p>0.05)。而肾AIF蛋白分布程度依次为:空白对照组>TMP组>GM+TMP组>GM组。与对照组相比,GM组和GM+TMP组肾AIF蛋白表达变化较大,具有统计学差异(p<0.05),而TMP组虽有变化,但基本无差异;与GM组相比,TMP组表达量明显较高,有统计学差异,但与GM+TMP组相比,无统计学差异(p>0.05),但较GM组而言,GM+TMP组AIF蛋白表达量还是较高;TMP组和GM+TMP组AIF蛋白表达量无统计学差异(p>0.05)。胞核水平,耳蜗AIF蛋白分布程度依次为:GM组>GM+TMP组>TMP组≈空白对照组。与空白对照组相比,GM组耳蜗AIF蛋白表达变化较大,具有显著统计学差异(p<0.05),提示AIF通路相关性指标发生活化;与GM组相比,TMP组同样也具有一定差异性,而空白对照组、TMP组和GM+TMP组三组之间虽有一定差异,但无统计学差异(p>0.05),且GM+TMP组耳蜗AIF蛋白表达量较GM组有一定改观,但彼此之间无统计学差异(p>0.05)。而对于肾,其表达量基本一致,没怎么改变。[结论]1.庆大霉素具有耳、肾毒性,可成功建立耳肾损伤模型,而AIF信号通路在庆大霉素诱导耳肾毒性中的作用,表明AIF可能是庆大霉素致耳肾毒性的重要因素之一。2.川芎嗪可以改善大鼠ABR听阈、保护肾功能,有效抑制AIF蛋白的异常表达,从而起到防治庆大霉素耳肾毒性的作用。由此可见,TMP可能通过AIF信号通路来减轻庆大霉素所致耳肾损伤。