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目的:选用大鼠单侧输尿管梗阻(unilateral ureteral obstruction, UUO)-肾间质纤维化模型,观察1,25-(OH)2D3对肾组织中单核巨噬细胞(ED-1阳性细胞)浸润、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9),基质金属蛋白酶抑制剂-1(TIMP-1)基因和蛋白水平表达及血清TNF-α水平的影响,从单核巨噬细胞角度探讨活性维生素D3在肾间质纤维化中的保护作用和可能机制。方法:1实验动物分组将50只清洁级雄性SD大鼠,随机分为五组(每组10只):①UUO+1,25(OH)2D3高剂量治疗组;②UUO+1,25(OH)2D3低剂量治疗组;③UUO+贝那普利阳性对照组;④UUO空白对照组;⑤假手术组。给药方法:术后第一天给药,每天给药1次,UUO+1,25(OH)2D3高、低剂量治疗组分别按6ng/100g体重、3ng/100g体重给药,将骨化三醇溶于橄榄油,1ml灌胃/次,同时给予1ml生理盐水灌胃;UUO+贝那普利阳性对照组给予盐酸贝那普利片0.17mg/100g溶于生理盐水1ml灌胃,同时给予1ml橄榄油灌胃;UUO空白对照组仅行左侧输尿管结扎术,UUO空白对照组与假手术组均给予1ml橄榄油和1ml生理盐水灌胃。于术后第28天处死大鼠,取血清和左侧肾脏留做标本。2观察、检测指标2.1观察1,25(OH)2D对模型大鼠肾间质纤维化病理影响:①肉眼观察肾脏大体病理变化;②天狼猩红染色观察肾间质纤维化病理变化。2.2采用免疫组化法观察梗阻侧肾脏单核巨噬细胞浸润情况。2.3血清中TNF-α水平检测:腹主动脉取血,分离血清,采用ELISA法检测。2.4RT-PCR和Western blot法检测MCP-1、MMP-9、TIMP-1mRNA和蛋白表达水平的变化。数据资料用(χ±SD)表示。结果:1实验大鼠肾组织中胶原沉积(CVF)的情况假手术组大鼠肾间质中可见少量胶原沉积,UUO空白对照组肾间质中胶原沉积明显增多,其CVF值与假手术组相比,差异有统计学意义(P<0.05),UUO+1,25(OH)2D3高、低剂量治疗组胶原沉积量明显低于UUO空白对照组(P<0.05),UUO+1,25(OH)2D3高、低剂量治疗组与UUO+贝那普利阳性对照组的胶原沉积量,两两比较,差异物统计学意义(P>0.05)。2各实验组大鼠肾脏单核巨噬细胞(ED-1阳性细胞)浸润情况假手术组大鼠肾组织间质中偶见ED-1阳性细胞;UUO空白对照组肾间质中ED-1阳性细胞数明显高于假手术组(P<0.05),主要见于肾间质,呈灶性或弥漫性分布;UUO+1,25(OH)2D3高、低治疗组ED-1阳性细胞数较UUO空白对照组有明显减少(P<0.05),UUO+1,25(OH)2D3高剂量治疗组与UUO+贝那普利阳性对照组ED-1阳性细胞数无统计学差异(P>0.05)。3各实验组大鼠血清TNF-α水平的变化UUO空白对照组术后大鼠血清中TNF-α浓度水平,较假手术组有明显增高(P<0.05),各治疗组及阳性对照组大鼠血清TNF-α浓度水平较UUO空白对照组有明显降低(P<0.05)。UUO+1,25(OH)2D3高剂量治疗组与UUO+贝那普利阳性对照组血清TNF-α浓度水平无统计学差异(P>0.05)。4各实验组大鼠肾脏MCP-1、MMP-9、TIMP-1mRNA水平的表达4.1MCP-1、TIMP-1: UUO空白对照组MCP-1、TIMP-1mRNA的表达呈高表达,与假手术组比较,差异具有统计学意义(P<0.05),UUO+1,25(OH)2D3治疗组及UUO+贝那普利阳性对照组MCP-1、TIMP-1mRNA的表达明显被抑制,与UUO空白对照组相比,具有统计学意义(P<0.05)。4.2MMP-9: UUO+1,25(OH)2D3高、低治疗组及UUO+贝那普利阳性对照组MMP-9mRNA的表达明显高于UU O空白对照组相比(P<0.05),假手术组MMP-9mRNA的表达,与UUO空白对照组相比,差异有统计学意义(P<0.05)。假手术组MCP-1、MMP-9、TIMP-1mRNA有基础量的表达,UUO+1,25(OH)2D3高剂量治疗组与UUO+贝那普利阳性对照组MCP-1、MMP-9、TIMP-1mRNA的表达无统计学差异(P>0.05)。5各实验组大鼠肾脏MCP-1、MMP-9、TIMP-1蛋白水平的表达5.1MCP-1、TIMP-1: UUO空白对照组大鼠肾组织中MCP-1、TIMP-1的蛋白呈高表达,与假手术组相比明显增高(P<0.05), UUO+1,25(OH)2D3治疗组及UUO+贝那普利阳性对照组MCP-1、TIMP-1的蛋白表达较UUO空白对照组明显降低(P<0.05)。5.2MMP-9: UUO空白对照组大鼠肾组织中MMP-9的蛋白表达明显高于假手术组(P<0.05),UUO+1,25(OH)2D3治疗组及UUO+贝那普利阳性对照组MMP-9的蛋白表达高于UUO空白对照组(P<0.05)。1,25(OH)2D3对肾组织中MCP-1、MMP-9、TIMP-1蛋白表达的作用与贝那普利相似,两组之间的差异均无统计学意义(P>0.05),假手术组大鼠肾组织中MCP-1、MMP-9、TIMP-1的蛋白有基础量表达。结论:11,25-(OH)2D3可以抑制UUO大鼠纤维化肾组织MCP-1表达和单核巨噬细胞的浸润和活化。21,25-(OH)2D3可以降低UUO大鼠血清TNF-α水平,减轻TNF-α介导的炎性作用对肾组织的损害,从而发挥对肾脏的保护作用。31,25-(OH)2D3可以上调UUO术后大鼠肾组织中MMP-9mRNA和蛋白的表达,降低TIMP-1mRNA和蛋白的表达,调节肾间质MMP-9/TIMP-1的平衡,进而促进ECM的降解,减轻肾间质纤维化。41,25-(OH)2D3具有与贝那普利相似的抑制肾间质纤维化作用。