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目的旨在探讨内质网应激在卵巢癌顺铂化疗耐药中的作用及其调节的分子机制,从而探讨内质网应激在卵巢癌顺铂耐药中的作用,为临床研发有效逆转卵巢癌顺铂耐药的新方法开辟新思路。方法本研究通过Western免疫印迹法检测SKOV3和SKOV3/DDP细胞中GRP78蛋白的表达以及不同浓度沙奎那韦作用后SKOV3细胞GRP78蛋白的表达。通过RT-PCR法及Western免疫印迹法检测不同药物对SKOV3细胞mTOR、Beclin1mRNA及蛋白表达的影响。采用MTT法测定SKOV3细胞的顺铂IC50值以及不同剂量沙奎那韦对卵巢癌SKOV3顺铂敏感性的影响,通过3-MA抑制细胞自噬后,观察其对SKOV3细胞顺铂敏感性的影响。结果1.SKOV3/DDP细胞中GRP78蛋白表达量比SKOV3细胞增高28.58%,差异有统计学意义(t=5.304,P=0.006)。2.不同浓度沙奎那韦作用SKOV3细胞后,GRP78蛋白表达量随着沙奎那韦浓度的增大逐渐增加。实验分为4组,沙奎那韦10μmol/l、沙奎那韦20μmol/1、沙奎那韦40μmol/1组与对照组。其中沙奎那韦10μmol/1、沙奎那韦20μmol/1、沙奎那韦40μmol/1组与对照组相比,GRP78蛋白分别增高了23.48%、35.39%、41.46%,各实验组GRP78蛋白表达量不同,有统计学意义(F=136.791,P=0.000),所有组间的表达差异有统计学意义(P<0.05)。3.沙奎那韦可以降低SKOV3细胞对顺铂的敏感性。SKOV3细胞顺铂IC50值为5.49p.g/ml沙奎那韦10μmol/1、20μmol/1作用后,顺铂IC50值为11.199μg/ml、14.906μg/ml,敏感性分别降低了1.04倍、1.72倍。4.实验分为对照组、沙奎那韦组、LY294002组、DDP组、沙奎那韦+DDP组,mTOR mRNA在SKOV3细胞中的表达量依次为沙奎那韦+DDP组>沙奎那韦组>LY294002组>DDP组>对照组。mTOR mRNA在各实验组间的表达量不同,有统计学意义(F=613.061,P=0.000)。Beclinl mRNA在SKOV3细胞中的表达量依次为沙奎那韦+DDP组>沙奎那韦组>LY294002组>DDP组>对照组。Beclinl mRNA在各实验组间的表达量不同,有统计学意义(F=4002.353,P=0.000)。5.实验分为对照组、沙奎那韦组、LY294002组、DDP组、沙奎那韦+DDP组,mTOR蛋白在SKOV3细胞中的表达量依次为沙奎那韦+DDP组>沙奎那韦组>LY294002组>DDP组>对照组。mTOR蛋白在各实验组间的表达量不同,有统计学意义(F=42.959,P=0.000)。Beclinl蛋白在SKOV3细胞中的表达量依次为沙奎那韦+DDP组>沙奎那韦组>LY294002组>DDP组>对照组。Beclinl蛋白在各实验组间的表达量不同,有统计学意义(F=105.629,P=0.000)。6.3-MA作用于细胞后,沙奎那韦对SKOV3细胞顺铂敏感性增强。3-MA抑制细胞自噬后,沙奎那韦10μmol/l、20μmol/l组顺铂IC50值为6.6236μg/ml、7.8884μg/ml。结论1、诱导内质网应激可导致卵巢癌SKOV3顺铂敏感性下降。2、内质网应激可能通过mTOR、Beclinl途径上调细胞自噬、进而导致细胞顺铂敏感性降低,抑制肿瘤细胞自噬可有效增强卵巢癌SKOV3顺铂敏感性。肿瘤细胞内质网应激与细胞自噬可能成为肿瘤化疗中提高疗效及逆转耐药的新靶点。