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血管内皮生长因子(Vascular Endothelial Growth Factor,VEGF)对血管内皮细胞有促增殖的作用,是与细胞的生长与分化有关的重要生长因子。在雌性哺乳动物的生殖过程,包括早期胚胎发育,胚胎着床及子宫蜕膜化妊娠的维持及分娩等过程中,VEGF都起着十分重要的作用。但VEGF必须与其相应受体(Vascular Endothelial Growth Factor Receptor,VEGFR)相结合才能发挥生物学活性。VEGF受体在表达定位已有许多学者在禽、猪、人等动物上作过大量研究工作,但在妊娠绵羊上尚未作研究。因此本文以繁殖力高低不同的两个绵羊品种为研究对象,研究血管内皮生长因子受体——Flt-1基因在其妊娠期生殖器官表达变化水平,以期为对哺乳动物胚胎的体外发育、胚胎移植和雌性哺乳动物生殖系统疾病的治疗提供参考依据。本文以妊娠期东北细毛羊和小尾寒羊成年母羊的雌性生殖器官——子宫、输卵管和卵巢为研究对象,通过对VEGF受体Flt-1基因(the fms-like tyrosine kinase,Flt-1)cDNA文库构建、T-A克隆技术,将Flt-1基因cDNA PCR扩增产物克隆至pMD19-T-Vector中,转化至受体菌JM109中,通过质粒提取、PCR、序列测定等方法鉴定构建出重组阳性克隆质粒pMD19-T-VEGFR1。同时以β-Actin作为内源性内标,采用了反转录一聚合酶链式反应(RT-PCR)方法检测了Flt-1mRNA在东北细毛羊和小尾寒羊的不同的妊娠时期子宫、输卵管和卵巢中的表达规律。研究结果表明:(1)用反转录聚合酶链式反应(RT—PCR)技术,从绵羊子宫角的总RNA中扩增了82bp的Flt-1的部分基因。经DNAsis软件分析核苷酸序列,结果显示该实验株与NCBI报道的同源性达到98.9%。(2)在相同的妊娠期间里,东北细毛羊和小尾寒羊成年母羊雌性生殖器官中Flt-1基因有相同的表达趋势,各期的子宫内膜上Flt-1mRNA都强烈表达,在输卵管和卵泡上可见有少量的表达,Flt-1mRNA的表达的强度为:子宫>输卵管>卵泡,各组间差异显著(p<0.05)。(3)绵羊在不同妊娠期间子宫内膜中Flt-1的mRNA强烈表达,且妊娠早期<妊娠中期<妊娠晚期,Flt-1的mRNA表达量有逐渐增强的趋势。各组间差异显著(p<0.05)。(4)在相同的妊娠时期,小尾寒羊妊娠母羊子宫内膜中的Flt-1 mRNA的表达量高于东北细毛羊妊娠母羊,且前者Flt-1mRNA的表达量相对较高,后者相对较低,说明小尾寒羊为较高繁殖力绵羊,东北细毛羊为较低繁殖力绵羊,组间差异不显著(p>0.05)。