新疆葡萄树伤流液化学成分分析及抗氧化性研究

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目的:1、对新疆不同品种、产地葡萄树伤流液中组分及抗氧化活性进行比较测定;2、以新疆喀什产的木纳格品种的伤流液为研究对象,以体外抗氧化试验为活性评价手段,采用HPD400大孔树脂对其抗氧化活性物质进行初步纯化,并结合高效液相色谱、制备液相色谱法进一步分离纯化。方法:1、采用系统预实验方法对新疆葡萄树伤流液的化学成分进行了初探。2、以没食子酸为标准品,采用Folin-Ciocalteu比色法测定新疆不同品种葡萄树伤流液中总多酚的含量。3、采用异硫氰酸苯酯(PITC)为柱前衍生化试剂衍生化后进行高效液相色谱(HPLC)分析,测定9种新疆葡萄树伤流液中17种游离氨基酸的含量。4、采用电感耦合等离子体发射光谱法测定不同产地、不同品种的新疆葡萄树伤流液中各矿质元素的含量,并采用SPSS17.0主成分分析法和聚类分析法对测定结果进行特征分析。5、以新疆不同品种、产地的葡萄树伤流液为研究对象,采用分光光度法测定其还原能力、·OH、DPPH·、O2-·、NO2-·的清除能力,以VC作为对照。6、采用HPD400大孔树脂对喀什木纳格品种伤流液中抗氧化活性物质进行了纯化。采用高效液相色谱(HPLC)对HPD400大孔树脂60%乙醇洗脱部分进行了化学成分分析,测定了白藜芦醇的含量。同时HPLC测定了不同品种、产地的葡萄树伤流液及HPD400大孔树脂60%乙醇洗脱部分中6种单体酚(没食子酸、儿茶素、咖啡酸、表儿茶素、对香豆酸、阿魏酸)的含量。7、采用半制备液相色谱对HPD400大孔树脂60%乙醇洗脱部分进一步分离纯化,采用羟自由基测试盒对分离组分测定·OH的抑制率,以VC(0.2mg·mL-1)为对照。结果:1、葡萄树伤流液中可能含有氨基酸、蛋白质、糖类及其苷类、皂苷,可能不含黄酮类和生物碱类或是含量低未达检测限。2、以没食子酸为标准品,多酚的浓度在0-6mg·L-1范围内与吸光度有良好的线性关系。该方法的稳定性、重现性、精密度及加标回收率的RSD均符合药典要求。3、不同品种、产地葡萄树伤流液中游离氨基酸有11-16种,其中7种为必需氨基酸。4、经主成分分析得3个主成分,其累计方差贡献率达92.49%。第一主因子的方差贡献率为60.92%,故确定其所对应的Ca、Mg、P和S是新疆葡萄树伤流液中所含的特征元素。聚类分析将6个样品,基本按品种和地域性聚为2组。5、新疆葡萄树伤流液对自由基清除能力大小的顺序:·OH>DPPH·>O2-·,具有一定的清除NO2-·作用。6、喀什木纳格伤流液中的白藜芦醇经HPD400大孔树脂富集之后含量从34.53μg·L-1提高到344.65μg·L-1。新疆不同品种、产地的葡萄树伤流液中没食子酸的含量有差异,最高的是和田木纳格伤流液2.45μg·mL-1,最低的是阿图什木纳格伤流液0.29μg·mL-1。喀什木纳格伤流液中的没食子酸经HPD400大孔树脂富集之后含量从1.03μg·mL-1提高到1.44μg·mL-1。其它5种单体酚均部分检出。7、通过半制备液相色谱分离得到9个组分,对·OH的抑制率范围为48.89%-70.71%,VC(0.2mg·mL-1)为57.40%。结论:1、首次对新疆葡萄树伤流液中的化学成分进行预实验,为其资源的开发提供了理论参考。2、多酚含量同一品种不同地区有差异,同一地区不同品种也是有差异的,造成多酚含量差异的原因除了与品种有关外,还与地理环境有一定的关系。3、不同品种葡萄树伤流液的氨基酸含量差异较大,但是各类氨基酸含量分布与组成类似。4、不同产地、不同品种的葡萄树伤流液中矿质元素呈现一定的选择性累积和地域性差异。5、新疆葡萄树伤流液具有强的抗氧化活性,尤其清除·OH的能力最强,清除O2-·的能力最弱。6、HPD400大孔树脂对白藜芦醇具有好的富集作用,白藜芦醇、没食子酸及部分检出的5种单体酚,虽然含量低,但可能是葡萄树伤流液抗氧化活性物质之一。7、制备液相色谱进一步分离纯化得到的9个组分,均具有抗氧化活性,说明此法可以用来纯化葡萄树伤流液中抗氧化活性物质。
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