背景介绍:人核糖核酸酶抑制因子(human ribonuclease inhibitor, hRI)是核糖核酸酶A(RNase A )的抑制剂,广泛存在于哺乳动物细胞浆中,它可与中性及碱性RNase A以1:1结合抑制其活性。血管生成素(angiogenin, Ang)是近来发现的一种强效的促血管生成因子,在眼部生理和病理性新生血管生成过程中,在大部分环节都发挥着重要作用。由于Ang与RNase A有35%的同源性,且立体结构也极其相似,因此二者均可作为配体与RI紧密结合,且RI与Ang的亲和力比与RNase A的亲和力还要大60倍,因此我们推测RI通过与Ang结合,可以抑制新血管生成,本室已经研究发现RI可以抑制肿瘤组织周围的血管形成。目的:利用基因工程生产的方法,探究在最优条件下使融合蛋白GST-hRI可溶性表达;用GST-hRI对小梁切除术后的兔眼给药,探究通过hRI抑制伤口肉芽组织中新血管生成,进而抑制病理性瘢痕的形成,建立功能性的滤过通道和滤过泡,从而提高青光眼小梁切除术的成功率。方法:通过优化诱导剂IPTG的诱导浓度和诱导温度得到目的融合蛋白GST-hRI的可溶性表达。将多次培养的菌体收集,经超声破碎,收集离心后的上清,采用RNase A Glutathione-Sepharose 4B亲和层析柱分离纯化目的融合蛋白。对兔眼行小梁切除术,制备青光眼动物模型。实验组术前1天、术后每天用hRI滴眼,术后第14天处死动物取手术区组织。观测统计术后滤过泡的类型,并作组织切片进行HE染色观察微血管密度,评估该融合蛋白对兔眼小梁切除术后手术区新血管生成和瘢痕形成的抑制作用。结果:0.5mmol/L IPTG,16℃诱导表达8~10小时,超声破碎菌体得到可溶性大量表达的GST-hRI。治疗组的手术区新生血管数量少于对照组,瘢痕形成小,功能性滤过泡比例高。结论:青光眼滤过术后用hRI滴眼,hRI通过与Ang结合可以有效抑制手术区肉芽组织中血管新生,进而抑制瘢痕的形成,使功能性滤过泡易形成,保证房水的顺畅回流,使眼压降低,提高了滤过术的成功率。本实验为重组hRI的进一步应用提供了实验依据,hRI可能成为青光眼滤过术后一种辅助性治疗的一种新药。