基于PCR扩增技术的食品中常见植源性成分检测方法研究

来源 :合肥工业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:sunashelly
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在食品加工生产过程中,很多不法商贩将低价的植源性成分掺入高价原材料中,从而谋取高额利润,这对消费市场产生了负面影响,损害了国民经济,在某些情况下对特殊人群,例如过敏反应者,产生健康威胁,因此建立食品中植源性成分检测具有重要意义。本文以聚合酶链式反应技术(Polymerase chain reaction,PCR)为基础,结合侧向流试纸条技术(Lateral flow strip,LFS)和荧光偏振技术,建立了食品中植源性成分快速检测方法。主要内容如下:(1)利用PCR-LFS技术对食品中豌豆成分进行快速检测本方法将PCR技术和侧向流试纸条技术相结合,利用功能化修饰的豌豆引物,经过PCR扩增得到豌豆功能化修饰的产物,产物进行试纸条检测。豌豆产物一端FITC与乳胶微球偶联的FITC抗体结合,另一端生物素与T线上SAV结合形成夹心结构进而显色,未结合完全的乳胶微球上偶联的FITC抗体与C线上的二抗结合而显色。该方法操作简单安全,仅靠视觉就能定性分析,同时具有高的特异性,高灵敏度,对绿豆样本中掺假的豌豆成分的检测限为0.5%。(2)利用双重PCR-LFS技术对食品中红薯和玉米成分进行快速鉴定本方法将(1)中PCR-LFS技术进一步发展,利用两对功能化修饰的红薯和玉米引物,经过PCR扩增后得到红薯和玉米功能化修饰的产物,产物进行试纸条检测。红薯产物一端生物素与胶体金偶联的SAV结合,另一端DIG与C线上DIG抗体结合形成夹心结构进而显色;玉米产物一端生物素与胶体金偶联的SAV结合,另一端FITC与T线上FITC抗体结合形成夹心结构进而显色。该方法可以同时检测红薯和玉米成分,特异性高,对红薯样本中掺假的玉米成分的检测限为0.5%。(3)利用PCR和荧光偏振技术对食品中大豆过敏原成分进行快速定量检测本方法将PCR和荧光偏振技术相结合,利用FITC功能化修饰的大豆引物,经过PCR扩增后得到FITC修饰的产物,产物进行荧光偏振检测。在荧光偏振检测过程,实验组FITC修饰的引物由游离小分子状态变为双链大分子状态,此时FP值会增加,对照组依旧为游离引物状态,FP值基本不会变化,此外FP值与DNA浓度相关,具有一定线性关系,能进行定量检测。该方法特异性高,可以对大豆过敏原进行定量检测,大豆过敏原成分的检测限为0.5%。
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