【摘 要】
:
实验目的:子宫内膜癌通常与能量代谢紊乱有关,探讨子宫内膜癌细胞中能量代谢的作用机制对治疗子宫内膜癌具有重要意义。而丝氨酸作为人体内的八种非必需氨基酸之一,在人体内参与多种生理活动,可以为细胞增殖提供一碳单位、甘氨酸等,并在肿瘤进程中扮演重要角色。人体内的丝氨酸来源主要有两种途径:Ⅰ自身合成途径;Ⅱ通过外界环境摄取。磷酸甘油脱氢酶(phosphoglycerate dehydrogenase)是丝氨
论文部分内容阅读
实验目的:子宫内膜癌通常与能量代谢紊乱有关,探讨子宫内膜癌细胞中能量代谢的作用机制对治疗子宫内膜癌具有重要意义。而丝氨酸作为人体内的八种非必需氨基酸之一,在人体内参与多种生理活动,可以为细胞增殖提供一碳单位、甘氨酸等,并在肿瘤进程中扮演重要角色。人体内的丝氨酸来源主要有两种途径:Ⅰ自身合成途径;Ⅱ通过外界环境摄取。磷酸甘油脱氢酶(phosphoglycerate dehydrogenase)是丝氨酸合成的第一个酶也是限速酶,丝氨酸羟甲基转移酶(serine hydroxymethyltransferase 2)主要分布于线粒体中,可以将甘氨酸转化为丝氨酸。研究发现在结直肠癌细胞中限制丝氨酸合成联合培养基中缺少丝氨酸/甘氨酸可以抑制肿瘤生长,但该项研究没有具体揭示当丝氨酸合成抑制后并联合培养基中缺少丝氨酸/甘氨酸后的作用机制。因此本课题主要阐述激活转录因子4(activating transcription factor 4)在丝氨酸/甘氨酸缺失后在子宫内膜癌中的作用机制,为丝氨酸研究提供一个新思路,也为子宫内膜癌的治疗提供一个新的方法和策略。实验方法:1.采用TCGA大数据分析人子宫内膜癌组织与癌旁组织中PHGDH蛋白表达量的区别,具体分析了13对病人的癌组织和癌旁组织中的PHGDH表达含量的区别。随后通过分析子宫内膜癌患者的总进展生存期和无进展生存期,检测PHGDH与子宫内膜癌患者预后的关系。2.在子宫内膜癌细胞中,通过Quantitative Real-time PCR实验和Western Blot实验检测子宫内膜癌细胞中丝氨酸合成关键酶表达含量。3.通过si RNA转染抑制PHGDH后,检测抑制PHGDH后对AN3CA增殖活性的影响。随后用PHGDH抑制剂NCT-503处理AN3CA和Ishikawa细胞,并用PHGDH低表达的HEC-1-A细胞作为对照,检测NCT-503对PHGDH依赖的子宫内膜癌细胞的影响。4.研究抑制丝氨酸合成并联合培养基中缺失丝氨酸/甘氨酸对子宫内膜癌细胞活性的影响。用缺失丝氨酸和缺失丝氨酸/甘氨酸的培养基联合不同浓度的NCT-503处理AN3CA细胞,检测其对子宫内膜癌细胞的影响。5.检测PHGDH抑制细胞增殖的作用机制。通过DCFH-DA法检测了抑制PHGDH对ROS的影响,并用ROS的清除剂TOC预处理后,用DCFH-DA法检测了在子宫内膜癌细胞中ROS的变化。6.探讨抑制丝氨酸合成联合培养基中缺少丝氨酸/甘氨酸对ROS的影响。用DCFH-DA法检测了抑制PHGDH联合培养基中缺少丝氨酸/甘氨酸对ROS的影响,用TOC预处理后,通过DCFH-DA法检测了其对ROS的影响;用MTT法检测了其对子宫内膜癌细胞活性的影响;用Annexin V-FITC/PI和Western Blot法检测了其对AN3CA细胞凋亡的影响。7.研究抑制丝氨酸合成途径并联合培养基中缺失丝氨酸/甘氨酸对子宫内膜癌细胞活性的影响。用MTT法检测加入NCT-503和SHIN1并联合培养基中缺少丝氨酸/甘氨酸对子宫内膜癌细胞增殖的影响,并用TOC预处理后检测了加入TOC后对子宫内膜癌细胞增殖的影响。8.检测在子宫内膜癌细胞中p53能否调控PHGDH。首先检测了在五株子宫内膜癌细胞中p53蛋白的表达情况,随后在p53高表达的HEC-1-A和HEC-1-B细胞用p53抑制剂Pifithrinα处理24 h后,检测了抑制p53后对PHGDH的影响,并且挑选了p53低表达的AN3CA和Ishikawa细胞用p53诱导剂Nutlin-3a处理24 h后,检测了诱导p53后对PHGDH的影响。9.研究在子宫内膜癌细胞中ATF4能否调控PHGDH:在AN3CA和Ishikawa细胞中用ATF4的si RNA处理,然后分别用Western Blot法和Quantitative Real-time PCR法检测了沉默ATF4后对PHGDH和SHMT2的蛋白水平和m RNA水平的影响。为了进一步验证,我们随后用ATF4高表达质粒转染两株细胞后,用Western Blot法和Quantitative Real-time PCR法检测了对PHGDH和SHMT2的影响。当缺失丝氨酸/甘氨酸后我们检测了ATF4、PHGDH和SHMT2的m RNA和蛋白表达含量的变化。实验结论:抑制PHGDH可以升高ROS,进而影响子宫内膜癌细胞的增殖和诱导子宫内膜癌细胞凋亡。在丝氨酸/甘氨酸缺失后抑制丝氨酸的合成可以有效抑制子宫内膜癌细胞的增殖,而ROS清除剂TOC则会逆转这种现象。缺失丝氨酸/甘氨酸后,会引起ATF4蛋白的升高,ATF4升高后进而会促进PHGDH和SHMT2蛋白表达量升高,从而促进细胞内的丝氨酸合成途径,以维持肿瘤细胞生长。
其他文献
我国农作物秸秆利用率低,露天焚烧等处理导致环境污染和资源浪费等问题;商品混凝土缓凝剂目前多用葡萄糖酸钠,成本高;陶粒作为轻质材料使用越来越广泛,陶粒制备中需要提高坯体粘结强度的粘结剂。为秸秆找到合理应用途径,利用秸秆制备水泥基复合材料时需进行预处理,预处理环节产生的秸秆废碱液如果处理不当会对环境造成负面影响,对其充分利用才能实现零排放。利用麦秸碱溶物制备混凝土缓凝剂和陶粒粘结剂,为农业废弃物的利用
研究表明多胺(包括尸胺、腐胺、精胺和亚精胺等)可选择性地聚集在肿瘤组织中,高水平多胺能促进肿瘤生长和转移。针对肿瘤细胞对外源性多胺的摄取、胞内合成及代谢,已经发现了天然或合成的多胺类靶向性抗肿瘤药物。天然产物角鲨胺以及“鬼臼毒素-多胺”缀合物F14512结构中都含有多胺单元,并曾进入到临床研究阶段。近期研究发现一些具有荧光探针功能的多胺缀合物表现出不同的细胞器靶向性,可分别靶向线粒体、溶酶体、细胞
遗址土作为一种物质成分和内部结构特征复杂的多组分材料,其劣化机理和力学性能备受关注。以开封州桥遗址为例,随着开封市现代化建设的日益深入,位于开封闹市区的州桥土遗址现状不容乐观。州桥遗址主要以粉质黏土为主,材料强度较低、水敏性差,且所在地区自然环境复杂,遗址表面已经发生大面积开裂,其本体的稳定性逐渐降低。受文物保护的限制,考虑到土遗址具有唯一性,在土遗址表面开展试验研究存在难度。因此,在满足对土遗址
喹喔啉-2(1H)-酮作为非芳氮杂环的代表,并且因为其具有显著生理活性和药理活性受到广泛关注。研究发现大多数含喹喔啉酮结构药物都是对其C-3位进行修饰的。因此,对其C3-H官能团化已成为近年来的研究热点。同时,近年来可见光催化氧化还原反应得到了迅猛的发展,因为它具有绿色,环保,反应条件相对温和的特点。因此,利用可持续的光催化平台构建喹喔啉酮C3-H官能团已成当下热门。目前除了光催化产生的自由基直接
吊卡作为钻井提升系统的重要结构,强度与可靠性要求极高。为提高吊卡的强度与安全可靠性,对吊卡吊臂部位进行结构优化。利用有限元软件ANSYS workbench对吊卡的静态特性进行了研究分析;在此分析基础上,对吊臂结构优化设计参数进行了灵敏度分析与实验设计;并基于响应面法建立了优化的数学模型,再通过遗传算法得到最优设计方案。结果表明:当吊臂截面厚度b为94mm,吊臂截面半径R为87mm,吊臂截面偏离角
实验背景:根据2020年的全球癌症统计报告,女性乳腺癌已成为发病率最高的癌症,其次为肺癌、结直肠癌、前列腺癌和胃癌。目前,乳腺癌的治疗方法以手术治疗为首选方法,还有化疗、放疗及辅助治疗等方法。目前使用的抗肿瘤药物在抑制肿瘤细胞增殖作用中,通过抗有丝分裂作用干扰了细胞的有丝分裂,抑制了癌细胞的异常生长。乳腺癌化疗中常用的抗微管类药物紫杉醇、多西紫杉醇等药物存在严重的不良反应导致其临床应用受到限制。因
中国是盐渍土广泛分布的国家,盐渍土面积约为20多万平方公里。服役于盐渍土环境中的钢筋混凝土桩基结构由于受到土中氯离子的侵蚀,造成钢筋出现锈蚀现象,并产生大量的锈蚀产物,其体积大约为原钢筋体积的2~6倍,使部分桩体因膨胀开裂而不再承担竖向荷载,桩的侧阻力、端阻力及桩体强度均发生变化,使其耐久性出现较早劣化,承载性能下降,往往达不到设计使用寿命就过早失效,造成巨大的经济损失。GFRP材料(Glass
【目的】探明鄱阳湖流域内不同种植模式在自然降雨条件下的农田地表径流及氮、磷流失特征。【方法】选取旱作、水旱轮作及水作3种种植模式,通过连续2a的试验监测,分析不同月份和作物种类的降雨、径流及氮、磷流失特征。【结果】降雨量和径流量主要发生在每年的6—7月,不同种植模式中,作物径流量和产流系数以空心菜最大,晚稻最小,径流量与作物生长期间的降雨量大小基本一致;3个种植模式下的径流量大小排序为:旱作>水旱
烯基氮杂环丙烷是一类重要的化学合成砌块,其结构中含有烯烃和氮杂环丙烷张力环,广泛用于含氮原子,特别是含氮杂环化合物的合成。含氮杂环类骨架在具有生物活性的天然产物、农药和药物分子中广泛存在,如六元环的哌啶类镇痛药,吡啶类农药,四元环的β-内酰胺类药物等。在过去几十年中对烯基氮杂环丙烷的环加成反应研究多以氮杂环丙烷为反应模块,将其作为三元合成子发生[3+1]、[3+2]、[3+3]、[3+4]环加成反
吡咯是一类重要的五元含氮杂环化合物,广泛存在于生物活性分子,是天然产物及材料科学中重要的构建块。吡咯类化合物的构建在有机合成化学领域引起了研究热潮,开发新颖的、有效的、便捷的合成策略十分重要。然而,有关合成有价值且高度功能化的3-氮杂芳基吡咯的报道相对较少,可能是由于吡咯相应的位置被氮杂化合物取代时,起始底物难以合成或反应的官能团耐受性受限造成的。由于反应条件温和、绿色环保、工艺简便等优点,可见光