恶性肿瘤是导致全球总发病率和死亡率上升的重要原因,2020年约有1929万癌症新发病例以及996万死亡病例,造成严重的社会负担。肿瘤标志物在肿瘤风险评估、筛查、诊断、和治疗上发挥重要作用。DHX32是一种新型的RNA解螺旋酶,在结直肠癌、乳腺癌、肝癌组织中的表达水平高于癌旁组织,能够促进癌细胞的增值、迁移和侵袭,与患者的预后相关,有望作为新的肿瘤标志物。与组织标志物相比,血液标志物具有标本易获取、无创性、检测方法简便等优点,欲探究DHX32是否具有作为血液标志物的潜力,但是其在血液中是否有分泌以及如何分泌目前还未有相关研究。所以,本研究的目的是对DHX32胞外分泌现象及其分泌途径进行初步探索,建立DHX32的酶联免疫检测体系并将其用于临床标本的检测,评估其作为肿瘤标志物的价值。通过IP对细胞上清和人血清中的DHX32蛋白进行富集,再用WB对IP产物进行鉴定,明确了 DHX32可以分泌的现象。DHX32的分泌能被特异性阻断ER-Golgi经典分泌途径的抑制剂BFA阻断,且免疫荧光共聚焦显示DHX32与高尔基体和内质网有共定位,说明DHX32可以通过经典分泌途径进行分泌;通过ELISA能在外泌体中鉴定到DHX32蛋白,提示DHX32也可能通过非经典分泌途径-外泌体分泌途径进行分泌。基于课题组已有的单克隆抗体,筛选到了最优抗体配对11C8＆14F11*HRP,建立了血清解螺旋酶DHX32的酶联免疫检测体系。平行检测360例肿瘤标本和260例健康对照标本,发现DHX32表达水平在肿瘤标本和健康对照标本之间的差异具有统计学意义。在不同类型的恶性肿瘤中,只有肝癌、肺癌、乳腺癌、子宫肿瘤和胃癌与健康对照标本之间的差异具有统计学意义,其中在肝癌中的诊断效能最高,AUC为0.7965,灵敏度为61.29%,特异度为87.79%。DHX32的血清水平在恶性肿瘤中高于良性肿瘤高于癌前病变;临床病理分期Ⅳ期的肿瘤比Ⅰ～Ⅲ期的高,有远端转移组比非远端转移组高。在术后监测中,DHX32的升高预示患者有复发和转移的可能,而DHX32表达降低则预示着患者病情好转,提示血清解螺旋酶DHX32在肿瘤术后监测中可能具有临床意义。综上所述,本研究首次发现DHX32可以分泌到细胞外,并通过经典分泌途径和外泌体途径分泌;其次,建立了血清DHX32的酶联免疫检测体系,临床试验结果表明其在肝癌中的诊断效能较高;血清水平依次为恶性肿瘤高于良性肿瘤高于癌前病变,肿瘤Ⅳ期的比Ⅰ～Ⅲ期的含量高,有远端转移的比没有远端转移的高;在术后监测中,DHX32的持续升高预示着患者有复发和转移的可能,因此也可能在肿瘤术后监测中具有应用价值。