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目的:
应用以人AQP4为底物的ELISA定量检测血清和脑脊液抗AQP4抗体浓度,了解中国人群NMO患者中的抗AQP4抗体ELISA检测方法的敏感性及特异性。对比ELISA和细胞间接免疫荧光法抗AQP4抗体检出率,评估改良的ELISA是否适宜在临床上推广应用。
方法:
1收集2009年11月至2010年12月宣武医院神经内科五病区病例,分为视神经脊髓炎组、多发性硬化组、临床孤立综合征组和其他神经疾病组(包括急性脊髓炎、急性播散性脑脊髓炎、帕金森病、吉兰巴雷综合征、病毒性脑炎、脑血管病等)。另外准备30份健康者血清作为正常对照组。
2用ELISA方法检测各组患者的血清及脑脊液中抗AQP4抗体水平,根据OD值和标准曲线计算抗体浓度,以高于正常对照组血清抗AQP4抗体浓度的均值+3SD者为阳性。
3统计学分析:全部统计分析均应用SPSS11.5 for Windows统计软件进行,计量资料正态分布以均数±标准差((X)±s)表示,以t检验进行两组资料间的显著性检验,多样本组间比较采用方差分析;偏态分布用中位数、四分位数间距描述,以非参数检验进行组间资料显著性分析;分类数据无序资料应用x2进行显著性检验。ROC曲线分析评价诊断价值。P<0.05作为差异有统计学意义的标准,P<0.01为差异有显著统计学意义。
结果:
1 NMO组血清抗AQP4抗体水平明显高于健康对照组(P<0.01),明显高于非NMO组(CMS组、CIS组、OND组)(P<0.05)。
2 NMO组血清抗AQP4抗体阳性率为50.00%(14/28),高于CMS组(5/65)、CIS组(4/30)、OND组(6/52),(P<0.01)。
3本研究中NMO组、CMS组和CIS组间患者脑脊液抗AQP4抗体水平无统计学差异(P>0.05);血清和脑脊液中抗AQP4抗体浓度无相关性(P>0.05)。
4血清抗AQP4抗体诊断NMO的敏感性为50.00%,特异性93.71%。ROC曲线下面积为0.687,血清抗AQP4抗体水平诊断NMO有显著意义(P<0.01)。
5 NMO组血清抗AQP4抗体阳性率为50.00%(14/28),NMO限定形式(即NMO高危综合征)血清抗AQP4抗体阳性率为27.78%(5/18),两组抗体阳性率无显著性差异(P>0.05)。
6血清抗AQP4抗体可见于其他炎性脱髓鞘疾病(Balo、PML)。
7长节段脊髓损害组血清抗AQP4抗体阳性率32.14%(18/56),明显高于非长节段脊髓损害组8.77%(5/57)(P<0.01)。
8 ELISA与细胞间接免疫荧光法的血清抗AQP4抗体检出率相同,P=1.000。
结论:
ELISA定量检测血清抗AQP4抗体,在诊断NMO上有较高的敏感性和特异性,适用于血清抗AQP4抗体的临床检测:ELISA定量检测脑脊液抗AQP4抗体敏感性高,但特异性低,目前不适用于脑脊液检测。与目前临床应用的细胞间接免疫荧光法相比,ELISA血清抗AQP4抗体检出率相同,但由于ELISA费用低、耗时短,简便易行,不存在观察者依赖性,故适宜在临床上推广应用。