本文对BMP--2和BMSCs结合n--HA/n--LDIG复合材料修复兔桡骨缺损进行了研究。本研究分为三个部分：　　第一章：兔骨髓间充质干细胞的分离、培养、鉴定及诱导分化成骨细胞。　　目的：探讨兔BMSCs的分离、培养、鉴定及向成骨细胞诱导分化的方法，探讨BMSCs在体外增殖，定向分化能力。　　方法：取兔股骨的骨髓冲洗液，采用Percoll分离液密度梯度离心法结合贴壁筛选法分离、培养、纯化兔BMSCs，光镜下观察传代细胞生长状况和形态变化;MTT法检测细胞增殖情况，绘制生长动力学曲线;HE染色形态观察和流式细胞仪抗体鉴定兔BMSCs表面标记物;体外诱导P3 BMSCs向成骨细胞分化，对诱导分化为骨细胞进行Gomori钙钴法ALP染色和茜素红钙矿化结节染色鉴定向成骨分化的能力。　　结果：所分离培养的细胞形态均一，沿胞体长轴生长，呈旋涡状、网状、梭状、放射状，形成较典型的BMSCs。P3 BMSCs的生长曲线大致呈S型，第7～11天细胞处于高速增长期，细胞数量迅速增加;HE染色BMSCs形态呈长梭形或长三角形，细胞核浆比例大，核蓝染，胞浆丰富红染。流式检测细胞表面标记物显示BMSCsCD44表达百分率为98.63％，呈阳性，而CD45表达呈阴性。P3BMSCs在体外经成骨诱导3周后，Gomori钙钴法染色ALP呈阳性，胞浆显示有灰黑色颗粒或棕黑色或黑色沉淀。茜素红染色呈阳性，细胞间出现致密的圆形或者卵圆形矿化结节。　　结论：应用Percoll分离液密度梯度离心法和贴壁筛选法结合能分离、培养出兔BMSCs，是一种比较理想获取兔BMSCs的方法;兔P3 BMSCs纯度较高和良好的增殖能力，具有向成骨细胞定向分化的生物学特性，是组织工程理想的种子细胞，也为后续进行骨缺损修复实验奠定了坚实的基础。　　第二章：n-HA/n-LDIG复合材料的制备及与BMSCs体外复合培养的细胞生物学评价。　　目的：以赖氨酸盐，甘油及n-HA为主要原料，制备出一种新型n-HA/n-LDIG复合材料，分析其与BMSCs体外复合培养的生物相容性，探讨其作为组织工程支架的可行性。　　方法：选择赖氨酸盐和甘油为原材料，通过有机合成、聚合反应、纳米化、超临界抗溶剂结晶、超声分散等技术制备出n-HA/n-LDIG复合材料。电镜观察其结构及计算孔隙率，细胞计数法检测细胞对复合材料的黏附能力，MTT法检测复合材料对细胞增殖的影响，ALP活性和钙含量测定观察复合材料对细胞分化的影响。　　结果：n-HA/n-LDIG复合材料肉眼为白色散在，为比较均匀的粉状固体。扫描电镜可见类似天然松质骨的三维孔洞网络结构，透射电镜可见排列不规则的晶须和空穴。共培养从2h至10h，随时间细胞的黏附率有所增加，其中6h时细胞黏附率明显高于4h时，8h时明显高于6h时，其差异均有统计学意义(P＜0.05)。MTT实验结果显示共培养第2天到第16天，细胞在复合材料上数量随时间而增加，特别是从第6天开始复合材料上的细胞数量迅速增加，细胞处于对数生长期，12天后过渡到生长平台期，增殖缓慢。从第4天开始，黏附细胞的ALP相对活性和钙相对含量迅速上升;第8天时ALP相对活性和钙相对含量明显高于第4天时，第12天明显高于第8天时，其差异均有统计学意义(P＜0.05);12天后ALP相对活性和钙相对含量增加不明显，差异无统计学意义。　　结论：制备的n-HA/n-LDIG复合材料具备适宜的孔隙率和孔径，组成性质相似于天然骨结构，具有良好的生物学特性，是一种新型的纳米骨修复材料。n-HA/n-LDIG复合材料具备良好的细胞相容性，能为成骨细胞在其表面生长、增殖、分泌基质提供良好的微环境，是一种良好的骨修复替代材料，为其作为骨的快速修复和骨组织工程支架材料奠定了基础。　　第三章：BMP-2和BMSCs结合n-HA/n-LDIG复合材料修复兔桡骨缺损的实验研究。　　目的：构建兔桡骨缺损模型，探讨BMP-2和BMSCs结合n-HA/n-LDIG复合材料修复兔桡骨缺损的效果。　　方法：取新西兰大白兔构建兔桡骨缺损模型，实验组植入BMP-2和BMSCs结合n-HA/n-LDIG复合材料，对照组植入BMSCs结合n-HA/n-LDIG复合材料，空白组不植入任何材料。分别于2、4、8、12周随机处死家兔，进行动物大体观察，X线检查和Lane-Sandhu放射学评分观察骨缺损处愈合情况，通过组织学检查和Lane-Sandhu组织学评分观察骨缺损处的修复情况。　　结果：所有实验动物桡骨骨缺损模型构建均成功，未见皮下和肌肉组织充血、水肿、渗出及感染等现象。从大体观察，X线检查和组织学检查等发现随着时间的延长，实验组修复效果优于对照组，对照组优于空白组。实验组术后3、6、9周新生骨所占骨缺损面积百分比，Lane-Sandhu放射学评分，新生骨所占骨缺损面积百分比及Lane-Sandhu组织学评分均明显高于对照组，对照组均明显高于空白组，其差异均具有统计学意义(P＜0.05)。　　结论：BMP-2明显够促进早期成骨，缩短成骨时间，加速骨缺损区骨组织的再生和钙化;BMP-2和BMSCs结合n-HA/n-LDIG复合材料具有良好的骨缺损修复效果，能明显够促进早期成骨，缩短成骨时间，加速骨缺损区骨组织的再生和钙化，能为临床应用提供了理论基础和新思路，具有良好的临床应用前景。