光的散射性一直是阻碍生物大组织深度成像的主要因素,尽管目前出现许多旨在降低组织光散射的组织透明技术,但是这些技术或多或少存在技术缺陷而需要进一步改进。2013年报道的CLARITY技术则是一种全新的组织透明技术,和传统技术存在本质区别。这项技术首次将大脑组织转变成水凝胶结构并去除脑内脂质而使脑组织变透明,去除脂质能够降低光散射从而提高脑成像深度,同时大分子抗体标记物也更容易进入组织内部。CLARITY技术自被报道以来就以其显著的优势吸引着世界各地课题组对它进行完善改进,另外,最近两年CLARITY技术已被成功应用于各类神经疾病的高精度成像研究。本文主要分为两部分进行。第一部分进行了CLARITY技术一系列的摸索及优化工作,包括CLARITY技术必须的电泳装置的构建、电泳条件如温度、水凝胶溶液配比以及光折射率匹配溶液的优化等,并通过紫外分光光度计及BCA法分别测量了不同的条件下所获得的透明脑的透明度以及蛋白损失率,通过相关数据分析得到最优的CLARITY技术条件,最后开展免疫染色及共聚焦成像研究得到了一些14-3-3zeta蛋白的三维结构信息。接下来将CLARITY技术其应用于颞叶癫痫的成像研究。通过构建癫痫鼠模型并采用Timm染色法验证成功获得了颞叶癫痫模型,之后采用CLARITY技术透明了包含完整海马约3mm厚的小鼠脑切片并开展免疫染色及共聚焦成像,获取了14-3-3zeta蛋白和S262位点磷酸化Tau蛋白在癫痫小鼠海马CA1、CA3区的空间共定位信息,上述这些研究工作为后续深入展开癫痫全脑成像研究奠定了基础。