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目的:运用高通量测序技术和生物信息分析技术,探索下丘脑非编码RNA介导针刺改善他莫昔芬引发大鼠潮热的分子网络机理,为针刺改善乳腺癌内分泌治疗常用药物他莫昔芬引发潮热的作用提供科学依据。方法:将筛选出的基础体温较平均的36只清洁级10-11周雌性SD大鼠,随机分为对照组(12只)、造模组(24只)。以他莫昔芬灌胃建立大鼠潮热模型,造模成功后再将造模组随机分成模型组与针刺组,各12只,针刺组选取“三阴交”、“关元”和“太冲”穴给予手针治疗,隔日一次,共治疗10次。1.针刺改善他莫昔芬引发大鼠潮热的效应:用热电偶测温仪持续监测大鼠尾温,用酶联免疫吸附法(ELISA),测试大鼠血清雌激素水平,以观察针刺疗效。2.lnc RNA介导针刺改善他莫昔芬引发大鼠潮热的机理研究:运用hiseq X高通量测序平台,构建针刺改善他莫昔芬引起潮热大鼠的下丘脑lnc RNA表达谱数据库,寻找差异lnc RNA并对其进行生物学信息分析。3.circ RNA介导针刺改善他莫昔芬引发大鼠潮热的机理研究:(1)运用hiseq X高通量测序平台,构建针刺改善他莫昔芬引发潮热大鼠的下丘脑的circ RNA表达谱,筛选出差异表达的circ RNA,并用RT-PCR技术对高通量测序结果进行验证;(2)运用GO及KEGG数据库生物信息学分析方法,筛选与差异表达circ RNA相关靶基因显著富集的GO生物学过程和信号通路;运用mi Randa软件预测剪切后的circ RNA的mi RNA结合位点,预测与差异表达circ RNA可能靶向的mi RNA;(3)运用Target Scan数据库,预测目标mi RNA的靶基因,将其与高通量测序筛选出的针刺治疗后差异表达的m RNA进行覆盖对比分析,挑选出预测的靶基因与高通量测序检测的m RNA表达一致的m RNA,创建circ RNA-mi RNA-m RNA的ce RNA网络,揭示下丘脑circ RNA介导针刺改善他莫昔芬引发大鼠潮热的分子网络调控机理;(4)通过RT-PCR技术检测目标mi RNA的表达量,验证mi RNA的表达趋势是否与预测的结果一致,进一步证实circ RNA-mi RNA-m RNA的ce RNA网络的可靠性。结果:1.针刺改善他莫昔芬引发大鼠潮热的效应结果:给予他莫昔芬28天后,造模组尾温明显高于对照组,针刺治疗后针刺组尾温较模型组明显下降,两项差异均具有统计学意义(P<0.05);模型组血清雌激素水平较对照组降低,针刺后血清雌激素较模型组增高,接近对照组。2.lnc RNA介导针刺改善他莫昔芬引发大鼠潮热的机理研究结果:下丘脑内差异表达的lnc RNA筛选结果,即以P≤0.05为筛选条件,模型组/对照组中,发现差异表达的Lnc RNA共21个,其中上调的10个、下调的11个;而在针刺组/模型组的比较中,发现差异表达的Lnc RNA共16个,其中上调有5个,下调有11个。其中显著差异表达的Lnc RNA(P≤0.05、)差异表达的m RNA共有440个,上调的有281个,下调的有159个。(2)针刺组/模型组,显著差异的lnc RNA与差异m RNA共表达且趋势一致的靶基因共有2个,为LNC＿002164的trans靶基因LOC102553099及Sra1。GO富集分析结果显示,模型组/针刺组共有85条生物学途径显著富集,主要有嘌呤核糖核苷三磷酸生物合成过程、能量耦合质子传输、ATP合成耦合质子转运、细胞代谢等;KEGG富集分析结果显示模型组/针刺组共有9条信号通路显著富集,主要有氧化磷酸化、帕金森病、亨廷顿病等。3.circ RNA-mi RNA-m RNA网络介导针刺改善他莫昔芬引发大鼠潮热的机理研究结果:(1)以P≤0.05为筛选标准,模型组/对照组共有74个差异表达的circ RNA,其中上调有25个、下调有49个;针刺组/模型组:共有53个差异表达的circ RNA,其中上调28个、下调25个;模型组/对照组与针刺组/模型组共表达的差异circ RNA有5个;(2)针刺组/模型组,共显著富集了288条生物学途径,主要有磷脂酰肌醇3-激酶级联反应介导的胰岛素受体信号通路通过、突触传递、细胞内运输等;KEGG富集分析显示,4条信号通路显著富集分别为谷氨酸能突触、钙离子通路、胃酸分泌、胆碱能突触。circ RNA/mi RNA结合位点分析结果显示,novel＿circ＿0004124可与rno-mi R-6320、rnomi R-132-3p、rno-mi R-212-3p、rno-mi R-6316、rno-mi R-6319相结合(排名前五位);(3)Target Scan数据库预测出mi R-132/212-3p的靶基因共有412个,其中有5个与针刺组/模型组差异表达的m RNA共有相同的下调趋势,分别为Hnrnpu、Pam、N4bp212、Atp6v1h、Hnrnpr。(4)RT-PCR检测mi R212-3p结果显示,针刺组mi R212-3p的表达量明显高于模型组,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:1.他莫昔芬可诱发大鼠的潮热症状;针刺对他莫昔芬引发大鼠的潮热症状有明显的改善作用,且在一定程度上可提高潮热大鼠雌激素的水平。2.下丘脑差异表达的LNC＿002164可能参与针刺改善他莫昔芬引发潮热的过程。3.下丘脑circ RNA参与针刺对他莫昔芬引发潮热的调节是多靶点、多生物学途径、多信号通路的。novel＿circ＿0004124是针刺改善他莫昔芬引发潮热大鼠下丘脑差异最显著的circ RNA,突触传递可能是重要参与的生物学途径,谷氨酸能突触、钙离子通路可能为重要参与的信号通路;下丘脑novel＿circ＿0004124-mi R-132/212-3p-Pam分子网络调控可能为针刺改善他莫昔芬引发潮热的关键环节。