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绵羊球虫病是由艾美耳属(Eimeria)球虫引起的一种自限性原虫病,绵羊各年龄段对球虫均易感,尤其是断奶羔羊感染后临床症状最为严重。球虫感染可导致羔羊出现不同程度的肠道炎症,临床表现为精神萎靡、食欲不振、腹泻、脱水、体重减轻,甚至能导致羔羊死亡,其中类绵羊艾美耳球虫(Eimeria ovinoidalis)被认为致病性最强,危害最大。由于绵羊球虫往往是几种球虫混合感染,导致人们对类绵羊艾美耳球虫的致病性研究不足。本试验对类绵羊艾美耳球虫进行分离纯化,感染断奶羔羊,分析其对羔羊精神状态、生长性能、血液指标、肠道菌群及代谢物的影响,同时探究其内生发育情况,为防控绵羊球虫病,指导临床用药提供基础资料。1类绵羊艾美耳球虫分离与鉴定通过形态学鉴定,应用单卵囊分离技术获得类绵羊艾美耳球虫纯种卵囊,通过感染3日龄羔羊使其排出较多卵囊,收集纯种后代孢子化卵囊后感染1月龄羔羊从而获得大量继代卵囊。同时对扩增、继代扩增的排卵囊规律、卵囊的形态结构进行了研究,并对获得卵囊的小亚基核糖体核酸RNA(SSU r RNA)和细胞色素C氧化酶I(COI)位点进行PCR扩增并分析,结果显示扩增和继代扩增所获球虫卵囊,与其亲本卵囊和文献报道的类绵羊艾美耳球虫的形态学与分子生物学特征相一致;但在使用3日龄羔羊进行球虫扩增时发现羔羊排卵囊规律与文献报道稍有差异,潜隐期比有关报道稍长。2类绵羊艾美耳球虫对羔羊的致病性研究选择已做驱虫处理的50日龄断奶羔羊,分为4组,除对照(C)组外,高(H)、中(M)、低(L)剂量组,分别感染5×10~4个卵囊、3×10~4个卵囊和1×10~4个卵囊,观察人工感染后各组羔羊的临床症状,定期采样检测排卵囊规律、称重评价生长性能,并采集C组和H组羔羊血液进行血液指标和细胞因子检测,对不同时间点感染组羔羊肠道制作病理切片并观察类绵羊艾美耳球虫内生发育情况。结果表明,类绵羊艾美耳球虫感染断奶羔羊潜隐期为11 days(d),显露期为5~6 d,高峰期在13~15 days post infection(dpi),感染羔羊食欲不振、精神沉郁、腹泻、脱水、体重下降,症状严重程度与感染剂量呈正相关,感染3×10~4个卵囊即可引起羔羊死亡;血液指标分析发现H组红细胞、血红蛋白增长量显著高于C组(P<0.05)且在14 dpi浓度达到最高,H组血红蛋白浓度增长量始终高于C组,且在14 dpi显著高于C组(P<0.05);H组血小板增长量高于C组,在14 dpi时极显著高于C组(P<0.01);H组和C组白细胞浓度变化无显著差异,但在0~14 dpi时,H组白细胞数量减少且低于C组,14~21 dpi浓度开始升高。与C组相比,H组羔羊血清中的IFN-γ、IL-6和IL-17显著升高,21 dpi时均显著高于C组(P<0.05),其中IL-17在7 dpi时已极显著高于C组(P<0.01),H组中的IL-10表达量从7 dpi开始下降,在21 dpi时两组差异显著(P<0.05)。对对照组和感染组羔羊肠道病理切片观察发现,球虫感染能够导致羔羊肠道黏膜脱落、上皮细胞被破坏、隐窝结构不完整、出血严重等,同时发现类绵羊艾美耳球虫第一代裂殖体主要寄生于羔羊回肠隐窝上皮细胞和固有层细胞,第二代裂殖体以及配子体和合子主要寄生于盲肠和结肠隐窝上皮细胞中。以上结果表明类绵羊艾美耳球虫感染能够导致羔羊出现严重的临床症状,引发急性炎症,大量寄生破坏肠道结构,导致营养物质吸收减少,影响羔羊增重。3类绵羊艾美耳球虫感染对羔羊肠道菌群和代谢物的影响采集C组和H组羔羊不同时间点直肠粪样,分析类绵羊艾美耳球虫感染对羔羊肠道菌群和代谢物的影响。结果表明,类绵羊艾美耳球虫感染破坏肠道微生物群平衡,导致羔羊肠道菌群丰度和多样性降低,尤其是在排卵囊高峰期会促进变形菌门和放线菌门中的一些有害菌的繁殖,降低有益菌如毛螺菌科、理研菌科等的丰度;在显露期后期,肠道中的有害菌丰度降低,颤螺菌属、毛螺菌科等能够产生抗炎物质的有益菌丰度开始升高,肠道菌群丰度与多样性也趋向C组。H组和C组羔羊主要的代谢物为脂肪酰类化合物、有机氧化合物、类固醇及其衍生物等,萜类和聚酮类化合物的代谢为其主要代谢通路。球虫感染会导致H组与C组差异代谢物和代谢通路增多,但随着时间增长,这种差异逐渐减小。在排卵高峰期时,尽管具有抗菌作用的代谢物如利维霉胺出现上调,但此类代谢物过量仍会诱导内毒素的产生,而丁酸等具有抗炎作用的代谢物出现显著下调,同时影响碳青霉烯生物合成、磷壁酸生物合成等代谢通路;排卵囊高峰期之后丁酸含量开始增加,鹅去氧胆酸等能促进羔羊出现腹泻的代谢物开始显著下调,但是发现与生命息息相关的硫代谢和氮代谢水平下调,说明在显露期后期尽管机体免疫力有所提升,但球虫对机体的影响仍然存在。综上所述,类绵羊艾美耳球虫感染能够导致羔羊出现严重临床症状,诱导急性炎症的发生,破坏肠道内环境稳态,代谢物和代谢通路产生差异,从而影响羔羊正常生长发育,降低产品质量,影响产业发展。