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细胞骨架是由微丝、微管和中间丝纤维组成的一种超微结构，其中微丝在细胞的结构支撑及运动功能中发挥关键性作用。有研究指出，微丝参与调节不同种细胞跨膜离子通道的活性。在神经细胞、肾小管上皮细胞和心肌细胞等众多细胞类型上，有关细胞骨架对钾通道的影响及其作用机制方面的研究已屡见不鲜。但在胃肠道平滑肌细胞尚无此类研究报道。 本实验的目的在于在胃窦环行肌细胞章明微丝对钙激活钾电流和延迟整流性钾电流的影响及其机制。 本实验以豚鼠为实验动物，采用Ⅱ型胶原酶急性分离单个豚鼠胃窦部环行肌细胞。急性分离后，肌细胞大多结构完整，且保持良好的生理功能。本实验采用传统全细胞模式的膜片钳技术，分别研究了在等渗条件和低渗导致膜牵张条件下，微丝与钙激活钾电流和延迟整流性之间的关系。统计学处理采用同体对照t检验和两个样本均数的t检验，所有实验数据均以均数±标准误来表示。 实验结果如下： 1．在膜片钳技术的传统全细胞模式下，采用阶跃刺激模式。细胞膜电位钳制在-60mV，每10s给予20mV的阶跃刺激使细胞膜咆位从-40mV去极化至+100mV，时间持续440ms。当电极内液含有钙离子螯合剂EGTA0.1mM时，阶跃式去极化刺激可激活钙激活钾电流(Calcium-activated potassium current, IK（Ca）)。在细胞膜去极化至+60mV时，IK（Ca）的平均幅度为826.6±72.6pA（n=15）。 2．在电极内液中加入20μmol／L细胞松弛素B（Cyt-B），膜电位钳制在-60mV，给予阶跃性去极化刺激，当膜电位去极化至+60mV时，IK（Ca）增加至对照组的133.4％±7.8％，与对照组相比较有显著性差异（p＜0.01，n=15）。 3．在电极内液中给予20μmol／L鬼笔环肽（phalloidin），膜电位钳制在-60mV，给予阶跃性去极化刺激，当膜电位去极化至+60mV时，IK（Ca）抑制至对照组的71.8％延边大学医学院消化生理学硕十学位论文摘要士3.3%，与对照组相比较具有显著性差异（p<0 .01，n=15）。 4.在传统膜片钳技术的全细胞模式下，采用阶跃刺激模式。细胞膜电位钳制在一60mV，每105给予20mV的阶跃刺激使细胞膜电位从一4OmV去极化至+S OmV，时间持续44（）ms。当电极内液含有钙离于鳌合剂EGI.A10mM时，阶跃式刺激可激活延迟整流性钾电流（delayed reetifier potassium eurrent，IK（V））。在细胞膜去极化至+60mV日寸，IK（v）的平均幅度为590.8士35.6pA（n=12）。 5.在几相同的刺激模式、刺激时程一下，电极内液中给予20协mol几细胞松弛素B（Cyt一B），当膜电位去极化至十60mV时，执v)增强至对照组的1 39.5%士8.5%，与对照组相比较具有显著性差异（p<0.01，n一12）。 6.电极内液中给予20卜mol几鬼笔环肤（phalloidin），给予相同的阶跃性去极化刺激，膜电位去极化至+60mV时，入帕抑制至对照组的71 .9%士49%，与对照组相比较具有显著性差异（p<0.01，n=!2）。 7.在相同的刺激模式、刺激时程下，我们用八通道灌流系统将等渗溶液替换为低渗溶液（2 00mosm），观察了胃窦环行肌细池匆ca)的变化。细胞膜电位钳制在一6omV，给予阶跃式去极化刺激时，低渗牵张由omV开始明显增强左（ca），当去极化至+6OmV时‘，使IK（ea）增加了50.6%士9.7%（尸<0.01，n一15）。 8.在」二述的刺激模式、刺激时程下，给予阶跃式去极化刺激，低渗牵张山+4OmV时开始明显增强人（
。，去极化至干60mV时，使左（V）增加了24.9%士3.3% （P<0 .01，xl=12）。 9.电极内液中加入20林mol/L细胞松弛素B的情况下，当膜电位去极化至+6 omv时使左（ca）增加了44.5%士7.9%，增加值与对照组相比较无显著性差异 （尸>0 .05，n=15）。 】0.在相同条件卜，电极内液中给予2诉:mol/L鬼笔环肤，当膜电位去极化至十60mV时，低渗牵张使入脚）增加了557%士9.8%（p<0.01，n=15），增加值与对照组相比较无显著性差异切>0.05，n一15)。 11.在电极内液中给予20“mol/L细胞松弛素B，膜电位去极化至+60mv时，低渗牵张使入帕增加了22.9土5.5%（p<0.（）l，n二12），但是增加值与对照组相比较无显著性差异切>0.05，n=12)。 12.相同条件下，电极内液中加入2。卜mol/L鬼笔环肤，当膜电位去极化至延边大学医学院消化生理学硕十学位论文摘要+6 omV时使入（v）增加了30.3%士4.5%（p（0.01，n二12），但是增加值与对照组相比较无显著性差异勿>0.05，n=12）。 以土实验结果提示:1.在豚鼠胃窦环行肌细胞，微丝参与调节钙激活钾电流和延迟整流性钾电流。2.在豚鼠胃窦环行肌细胞，低渗牵张增强钙激活钾电流和延迟整流性钾电流。3.在豚鼠胃窦环行肌细胞，其细胞骨架成分微丝可能不参与调节低渗牵张增强钙激活钾电流和延迟整流性钾电流的过程。