黄粉虫抗菌肽的制备、纯化及活性研究

来源 :西北农林科技大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:Tianxudong
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抗菌肽独特的抗菌机制及高效、广谱的抗菌活性使其在医药和食品领域有广阔的应用前景,然而极低的产量成为抗菌肽商业化应用的瓶颈。本文以蛋白质含量丰富的黄粉虫为原料,用碱性蛋白酶酶解黄粉虫蛋白制备抗菌肽,并对酶解工艺进行优化,最后对酶解液进行分离纯化,比较不同组分的抑菌活性,测定纯化后抗菌肽的热稳定性、对指示菌的最小抑菌浓度(MIC)以及分子量。主要研究结果如下:(1)碱提酸沉法从黄粉虫幼虫脱脂粉中提取蛋白,并分别以胰蛋白酶、碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶、中性蛋白酶、胃蛋白酶等5种蛋白酶进行酶解,结果碱性蛋白酶酶解物具有最强的抑菌活性。酶解物中酸溶肽含量为73.38mg/mL,产生抑菌圈直径为14.16mm。(2)以抑菌活性和肽含量为指标,选取酶解时间、酶解温度、加酶量、底物浓度、pH值5个因素进行单因素试验。根据单因素试验结果,选取影响显著的3个因素,采用中心组合设计对酶解工艺进行优化。得到最佳酶解工艺:底物浓度10%、酶解时间4.4h、加酶量 440U/gpro、酶解温度 54℃、pH 值 9.5。(3)通过DA201-C型大孔吸附树脂,酶解液被分为5个组分,无水乙醇洗脱组分表现出最强的抑菌活性。制备型HPLC将无水乙醇洗脱组分分为两个组分(H-1,H-2),H-2对大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌均表现出较强的抑菌活性。(4)微量肉汤稀释法测得黄粉虫抗菌肽H-2对大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌的MIC均为0.512mg/mL。热稳定性试验结果表明H-2对热稳定,121℃加热20min仍能保持活性。利用液质联用(LC-MS)对H-2进行鉴定,H-2的分子量为756.82。
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