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目的:糖尿病肾病(DN)指的是肾小球因糖尿病所产生的硬化症,它是因为糖尿病患者的不正常糖代谢而特定引发的肾脏方面的合并症,这种合并症发生在微血管上。临床以糖尿病症状加蛋白尿和(或)水肿为主要表现。从上世纪末到现在,糖尿病肾病在中医界研究者中引起广泛重视,除了在病因、病机和诊治方面取得进展,还在现代医学方法的帮助下,开展对糖尿病肾病中医证型与实验室指标、生物标志以及基因表达等相关研究,得到一定成果,比如初步弄清其在现代病理生理学方面的基础,对其中医方面学说的一些深入部分以及其合理性方面进行了解释。 本研究通过对临床收治过程中糖尿病肾病患者进行辨证施治,总结临床中糖尿病肾病的证型分布情况和规律;并通过比较辨证施治联合基础治疗组(联合治疗组)和基础治疗组(对照组)治疗疗效,从而证明中医治疗糖尿病肾病过程中的有效性和必要性,以及在改善糖尿病肾病病人生存质量方面的突出作用,为糖尿病肾病的中医辨证分型、临床治疗、判断病情以及预后等提供依据;同时对我科糖尿病肾病的辨证施治方药进行总结和分析,发掘用药规律并阐释临床用药心得,指导糖尿病肾病的临床辨证论治以及选方用药,对于中医药治疗糖尿病肾病具有良好的临床指导意义。 血浆中含大量的蛋白质,它们分别来自不同的器官、组织以及细胞,因而从血浆变化一定程度上可以推出身体任一时段任一部位的病理生理变化。因此,从血浆蛋白组学出发,结合糖尿病肾病的中医证型科研,讨论哪些蛋白质和该病证型关联,其重要性在于对中医证候的实质从整体方面进行评价。 方法:选择符合糖尿病肾病西医诊断标准的来自广州中医药大学一附院肾内科门诊以及住院部患者100例,由2位以上的中医专家对病人进行辨证诊断,结合糖尿病肾病Mogensen分期对证型分布进行统计分析;选择其中50例糖尿病肾病患者(非透析期)进行疗效观察,联合治疗组30例,对照组20例,对照组给予常规西医治疗方案,联合治疗组则在常规治疗的基础上进行辨证论治,治疗疗程为患者住院时间;同时收集来自广州中医药大学一附院肾内科以及门诊治疗糖尿病肾病的100张中药处方,对处方用药进行总结分析。同时对糖尿病肾病中医证候类型(肾阳虚型和肾阴虚型)以及正常人的外周血血浆蛋白质进行组学分析,具体包括双向凝胶电泳方法、质谱分析,筛分出差异性表达蛋白。 结果: 1.对证型分布研究表明,中医本证主要集中在脾肾气虚型、脾肾阳虚型、脾肾亏虚型,收集的病例多数分布在糖尿病肾病III期以后;兼证中浊毒血瘀居首,共15例(15%)。联合治疗组同对照组两组治疗前后中医综合疗效比较 P<0.05有统计学意义,联合治疗组治疗后部分患者蛋白尿有所改善;中药分布研究表明,100方中共涉及中药151味,按照出现频率排序如下:黄芪、白术、陈皮、茯苓、土茯苓、玉米须、丹参、法半夏、薏苡仁、山药,其比例分别为:65%,53%,51%,48%,47%,46%,43%,39%,36%,33%。 2.运用双向凝胶电泳技术对正常人、早期糖尿病肾病肾阴虚和肾阳虚患者的全血浆进行差异表达凝胶电泳分析,我们发现肾阴虚组和正常组电泳分析提示:有26个蛋白质斑点在肾阴虚组较正常组和肾阳虚组有显著差异;肾阳虚组和正常组电泳分析提示:有15个蛋白质斑点在肾阳虚组较正常组和肾阴虚组有显著差异;肾阴虚组和肾阳虚组电泳分析提示:8个蛋白质斑点有显著差异。 3.通过质谱鉴定,对差异蛋白质进行归类整理,发现(CA)组即与肾阴虚可能相关的差异表达的蛋白质有11个,他们分别是:尿苷酸合成酶亚型J、巨球蛋白、人血清白蛋白、补体C3b受体、人免疫球蛋白、载脂蛋白AI、HP蛋白质、CD5抗原、TPM3蛋白质、凝溶胶同工酶GT-B、人绒毛膜促性腺激素;其中在肾阴虚高表达蛋白质有补体C3b受体、人免疫球蛋白、HP蛋白质、TPM3蛋白质、凝溶胶同工酶GT-B、人绒毛膜促性腺激素;低表达蛋白质有:尿苷酸合成酶亚型J、巨球蛋白、人血清白蛋白载脂蛋白AI、CD5抗原。(BC)组即与肾阳虚可能相关的差异蛋白质有9个,他们分别是:补体C3b受体、人血清白蛋白、凝溶胶蛋白异构体、C4b的结合蛋白、人纤维蛋白原D、补体成分C4A、细胞角蛋白9、载脂蛋白E前体、泛素化因子E4B;其中在肾阳虚高表达蛋白质有:补体C3、人纤维蛋白原D、补体成分C4A、细胞角蛋白9、载脂蛋白E前体、泛素化因子E4B;低表达蛋白质有:人血清白蛋白、凝溶胶蛋白异构体、C4b的结合蛋白;(AB)组即肾阴虚组和肾阳虚组差异表达的蛋白质有7个,其中与肾阴虚组相关蛋白质有5个,分别是:免疫球蛋白重链变体、硒X,1、结合珠蛋白、层粘连蛋白亚单位的α-3亚型4、人绒毛膜促性腺激素;与肾阳虚组相关蛋白质有2个,分别是:α-胰蛋白酶抑制剂重链H4亚型2前体、载脂蛋白AI。差异蛋白主要与身体内细胞骨架构成、细胞活动、免疫应答、应激反应、氧化应激、信号传导脂代谢、激素调节等活动有关。 结论: 1.根据主证和兼证之分进行整理分析,发现在糖尿病肾病III期以后的病人中,大部分证型以脾肾亏虚为本,兼夹湿、浊、毒、瘀。通过对糖尿病肾病辨证治疗,本研究发现,中医药在改善患者生化指标、临床症状方面均有一定疗效;尤其是在对改善糖尿病肾病患者的临床症状方面有良好的效果。对中药的统计分析,可以发现在该科临床辨证治疗糖尿病肾病的过程中,注重从脾肾论治,以脾肾为本,湿、浊、热、瘀为标,根据具体病人辨证用药。 2.本研究通过比较早期糖尿病肾病患者(肾阴虚和肾阳虚)与正常人的外周血血浆中蛋白质表达谱,筛选出差异性表达蛋白,发现与肾阴虚可能相关的差异表达的蛋白质有11个,与肾阳虚可能相关的差异蛋白质有9个,肾阴虚组和肾阳虚组差异表达的蛋白质有7个(与肾阴虚组相关蛋白质有5个和与肾阳虚组相关蛋白质有2个),这些蛋白质多数与免疫、脂代谢、氧化应激相关。其重要性在于对中医证候的实质从整体方面进行评价,同时对糖尿病肾病的早期诊断、鉴别诊断、发病机制和病情判断预测有重要价值。