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背景:脊髓损伤(Spinal Cord Injury,SCI)是一种常见的严重创伤,常导致相应的脊髓、神经功能障碍,具有相当高的致残率,给患者、家属和社会带来极大的痛苦和沉重的负担。研究认为导致损伤脊髓的结构和功能难以恢复的主要原因是:脊髓损伤后局部微环境的变化不利于轴突的再生,而由此继发的神经传导束连续性的中断导致了临床上各种症状的发生。神经干细胞(Neural Stem Cells, NSCs)是中枢神经系统(central neural system, CNS)中具有自我更新能力和多向分化潜能的一种细胞,能在体外大量扩增,在体内和体外均可诱导分化成CNS内主要的三种细胞:神经元、星形胶质细胞、少突胶质细胞,是CNS损伤后再生修复较为理想的细胞材料。嗅鞘细胞兼具中枢和周围两个神经系统细胞特性,可表达和分泌多种细胞粘附分子及神经营养因子,对中枢神经元轴突再生有着其它类型细胞难以取代的的支持作用。本实验尝试利用hOECs与hNSCs(Hoechst33342标记)联合移植修复大鼠SCI,并将其与hOECs或hNSCs单独移植两种治疗方法相比较,旨在研究两种细胞联合移植对SCI治疗是否具有正向协同作用,为SCI移植治疗实验研究和临床研究探索新思路。第一部分人胚嗅鞘细胞体外培养的实验研究目的:探索利用延迟差速贴壁法结合阿糖胞苷抑制剂法对人胚嗅鞘细胞进行分离纯化的可行性,以期为SCI移植治疗实验研究提供材料。方法:①在解剖显微镜下分离hOECs。②利用延迟差速贴壁法结合阿糖胞苷抑制剂法对人胚嗅鞘细胞进行纯化。③用免疫细胞化学方法鉴定不同时期hOECs的纯度。结果:①成功培养出hOECs。②显微镜下,原代培养5d的hOECs胞体呈长梭形,多极状,立体感强,折光性好。8d后,胞体变大,突起变长,并逐渐相互交织成网。14d后细胞主要表现为双极、三极形态。③贴壁第2、7d的细胞染色,P75阳性达到95%以上。第1 4d细胞染色阳性率降