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目的:通过本实验,建立左金及单味药材体外UPLC-MS/MS化学指纹图谱和体内UPLC-MS/MS血清药物化学指纹图谱,进行体内药效学实验,获得左金抗胃溃疡的药效学数据,建立“谱-效关系”数学模型,明确与药效作用密切相关的指纹峰族即“有效组分”,确定各组分对整个复方药效作用的贡献系数,为后期制剂研究奠定基础。
方法:1.通过正交实验,优选黄连及吴茱萸的提取方法。2.通过对样品处理方法、色谱条件和质谱条件的筛选,建立黄连、吴茱萸及左金的UPLC-MS/MS体内外指纹图谱,通过体内外指纹图谱的比较,分析左金及其拆方共有成分在体内外的变化情况。3.通过动物体内药效学实验,结合指纹图谱,采用灰色关联度结合层次分析法建立“谱-效关系”数学模型,确定与左金抗胃溃疡总药效相关性大的指纹峰。
结果:1.建立了黄连、吴茱萸HPLC分析方法,经方法学分析均符合检测要求。通过正交实验,以指标成分含量、峰形及出峰个数,优选出黄连和吴茱萸的提取工艺,黄连以8倍60%的乙醇提取3次每次90min,吴茱萸以12倍85%的乙醇提取3次每次60min.2.建立了黄连、吴茱萸及左金的体内外UPLC-MS/MS指纹图谱,经过相似度分析,各指纹图谱相似度均大于0.9,表明所建立的UPLC-MS/MS方法稳定可靠。黄连体外化学指纹图谱共标定了14个共有峰,鉴定了8个化学成分,黄连体内血清指纹图谱标定了17个共有峰,鉴定了6个原型成分。吴茱萸体外化学指纹图谱共标定了14个共有峰,鉴定了8个化学成分,吴茱萸体内血清指纹图谱标定了18个共有峰,鉴定了1个原型成分。左金体外化学指纹图谱共标定了22个共有峰,鉴定了14个化学成分,左金体内血清指纹图谱标定了27个共有峰,鉴定了7个原型成分。3.药效学研究表明,左金对胃溃疡具有一定的抑制作用,可以不同程度的降低IL-8、TNF-α、PP、MDA的含量,与模型组比较具有显著的差异,同时可以不同程度的提高NO、SOD、EGF、PGE2的含量,与模型组比较具有显著的差异,结果具有统计学意义。4.灰色关联度结合层次分析法建立“谱-效关系”数学模型,结果22个共有峰与药效的关.联度均大于0.6,说明左金22个共有成分与抗胃溃疡的作用具有相关性,关联度顺序为:11(盐酸小檗碱)>10(盐酸药根碱)>9(表小檗碱)>4(小檗红碱)>12(盐酸巴马汀)>7(黄连碱)>16(吴茱萸碱)>17(吴茱萸次碱)>8(去氢吴茱萸碱)>13(13-甲基-小檗碱)>1(木兰花碱)>21(吴茱萸新碱)>6(未知成分)>3(未知成分)>20(1-mthyl2-nonul-4-(1H)-quinolone)>22(1-甲基-2<(6Z,9Z)-6,9-+五碳二烯基>-4(1H)-喹诺)>2(未知成分)>19(未知成分)>15(未知成分)>5(未知成分)>18(未知成分)。
结论:本研究在前期研究的基础上,建立了黄连、吴茱萸及左金的体内外化学指纹图谱,进行了左金抗胃溃疡的药效学研究,借助数学分析手段,初步确定了与左金抗胃溃疡总药效相关性大的指纹峰即“有效组分”,为完善左金药材的质量评价标准及进一步诠释其抗胃溃疡的药效物质基础提供科学依据。
方法:1.通过正交实验,优选黄连及吴茱萸的提取方法。2.通过对样品处理方法、色谱条件和质谱条件的筛选,建立黄连、吴茱萸及左金的UPLC-MS/MS体内外指纹图谱,通过体内外指纹图谱的比较,分析左金及其拆方共有成分在体内外的变化情况。3.通过动物体内药效学实验,结合指纹图谱,采用灰色关联度结合层次分析法建立“谱-效关系”数学模型,确定与左金抗胃溃疡总药效相关性大的指纹峰。
结果:1.建立了黄连、吴茱萸HPLC分析方法,经方法学分析均符合检测要求。通过正交实验,以指标成分含量、峰形及出峰个数,优选出黄连和吴茱萸的提取工艺,黄连以8倍60%的乙醇提取3次每次90min,吴茱萸以12倍85%的乙醇提取3次每次60min.2.建立了黄连、吴茱萸及左金的体内外UPLC-MS/MS指纹图谱,经过相似度分析,各指纹图谱相似度均大于0.9,表明所建立的UPLC-MS/MS方法稳定可靠。黄连体外化学指纹图谱共标定了14个共有峰,鉴定了8个化学成分,黄连体内血清指纹图谱标定了17个共有峰,鉴定了6个原型成分。吴茱萸体外化学指纹图谱共标定了14个共有峰,鉴定了8个化学成分,吴茱萸体内血清指纹图谱标定了18个共有峰,鉴定了1个原型成分。左金体外化学指纹图谱共标定了22个共有峰,鉴定了14个化学成分,左金体内血清指纹图谱标定了27个共有峰,鉴定了7个原型成分。3.药效学研究表明,左金对胃溃疡具有一定的抑制作用,可以不同程度的降低IL-8、TNF-α、PP、MDA的含量,与模型组比较具有显著的差异,同时可以不同程度的提高NO、SOD、EGF、PGE2的含量,与模型组比较具有显著的差异,结果具有统计学意义。4.灰色关联度结合层次分析法建立“谱-效关系”数学模型,结果22个共有峰与药效的关.联度均大于0.6,说明左金22个共有成分与抗胃溃疡的作用具有相关性,关联度顺序为:11(盐酸小檗碱)>10(盐酸药根碱)>9(表小檗碱)>4(小檗红碱)>12(盐酸巴马汀)>7(黄连碱)>16(吴茱萸碱)>17(吴茱萸次碱)>8(去氢吴茱萸碱)>13(13-甲基-小檗碱)>1(木兰花碱)>21(吴茱萸新碱)>6(未知成分)>3(未知成分)>20(1-mthyl2-nonul-4-(1H)-quinolone)>22(1-甲基-2<(6Z,9Z)-6,9-+五碳二烯基>-4(1H)-喹诺)>2(未知成分)>19(未知成分)>15(未知成分)>5(未知成分)>18(未知成分)。
结论:本研究在前期研究的基础上,建立了黄连、吴茱萸及左金的体内外化学指纹图谱,进行了左金抗胃溃疡的药效学研究,借助数学分析手段,初步确定了与左金抗胃溃疡总药效相关性大的指纹峰即“有效组分”,为完善左金药材的质量评价标准及进一步诠释其抗胃溃疡的药效物质基础提供科学依据。