【摘 要】
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植物内生细菌与植物共同进化,可产生相似或相同的次生代谢产物,具有如抑菌、抗肿瘤、抗氧化等多种活性,是获取天然活性产物的理想材料。紫茎泽兰作为一种入侵性毒草,已被证明能产生多种结构新颖的代谢产物。因此本课题以紫茎泽兰为研究对象,对其可培养内生细菌进行分离和纯化,从中筛选出抑菌活性显著且遗传稳定的菌株,并对其产生的抑菌活性物质进行初步分析,结果如下:1.通过表面消毒和组织块分离法从自然生长的紫茎泽兰根
【基金项目】
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四川省科技厅重大科技专项（2020YFS0337）；
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植物内生细菌与植物共同进化,可产生相似或相同的次生代谢产物,具有如抑菌、抗肿瘤、抗氧化等多种活性,是获取天然活性产物的理想材料。紫茎泽兰作为一种入侵性毒草,已被证明能产生多种结构新颖的代谢产物。因此本课题以紫茎泽兰为研究对象,对其可培养内生细菌进行分离和纯化,从中筛选出抑菌活性显著且遗传稳定的菌株,并对其产生的抑菌活性物质进行初步分析,结果如下:1.通过表面消毒和组织块分离法从自然生长的紫茎泽兰根、茎、叶和花组织中分离到95株内生细菌,经20%的甘油保藏备用。以大肠杆菌ATCC 35218、沙门氏菌H9812、绿脓杆菌ATCC 27853、肺炎克雷伯氏菌CMCC 46109和金黄色葡萄球菌CPCC 140594为指示菌,通过打孔法筛选出具有较强抑菌活性且能稳定遗传的内生细菌Ea73。菌株Ea73对5种病原菌的抑菌圈直径分别为:10.57、9.69、13.72、11.00和32.16 mm。经形态学和分子生物学方法鉴定Ea73菌株为贝莱斯芽孢杆菌（Bacillus velezensis）,命名为贝莱斯芽孢杆菌Ea73,登录号为MZ540895。2.以金黄色葡萄球菌CPCC 140594为指示菌,菌株Ea73发酵液对其抑菌圈直径为指标,通过单因素及响应曲面分析法优化菌株Ea73产抑菌活性物质的发酵条件。结果表明最佳发酵条件为:酵母浸膏（6.55 g/L）、蛋白胨（6.61 g/L）、Na Cl（20.00g/L）、初始p H:7.95、温度:27.97℃、时间:51.04 h。在最佳发酵条件下,菌株Ea73发酵液对金黄色葡萄球菌的抑菌圈直径可达40.76 mm,比优化前增加了8.16mm。3.在最佳发酵条件下,对菌株Ea73扩大发酵,经乙酸乙酯萃取后,通过硅胶柱层析、凝胶柱层析和制备高效液相色谱分离出2个化合物。经红外光谱、高分辩质谱和核磁共振鉴定为2种环二肽,Cyclo（L-Pro-L-Val）和Cyclo（L-Leu-L-Pro）。以金黄色葡萄球菌CPCC 140594和大肠杆菌ATCC 35218为指示菌,采用微量肉汤稀释法对2个化合物进行抑菌活性测定。结果显示2个化合物对指示菌均有不同程度的抑制作用,Cyclo（L-Pro-L-Val）对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的MIC值分别为512和256μg/m L,Cyclo（L-Leu-L-Pro）对两种病原菌的MIC值均为512μg/m L。综上,本试验从紫茎泽兰中分离出一株对金黄色葡萄球菌具有强烈抑制作用的贝莱斯芽孢杆菌Ea73,并对其产抑菌活性物质的发酵条件进行了优化。经优化后,其抑菌活性得到了显著提升,抑菌圈直径达40.76 mm。进一步从其发酵液中分离出两种环二肽类物质:Cyclo（L-Pro-L-Val）和Cyclo（L-Leu-L-Pro）,均表现出不同程度的抑菌活性。
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