猪瘟(Classical swine fever,CSF)是一种严重危害我国乃至全球养猪业的烈性传染病,是OIE要求需申报的动物疫病之一。CSF的病原体是猪瘟病毒(Classical swine fever virus,CSFV),该病毒的基因组长度为 12.3 kb,编码 4 个结构蛋白(Core、Erns、E1、E2),其中E2结构蛋白能够诱导机体产生中和性抗体,抵御CSFV强毒的攻击,是CSFV最主要的保护性抗原蛋白,因此是研究猪瘟疫苗的主要靶标蛋白。铁蛋白(Ferritin,FR)能够形成由24个亚基组成的八面体对称的近乎球形的蛋白颗粒,并且已经被用于疫苗的研究中。以纳米颗粒为骨架展示抗原可以大大提高抗原的密度,刺激机体产生更高的免疫应答水平,因此,可以利用铁蛋白自组装纳米颗粒研发安全、高效的疫苗。为了研制一株具有标记作用的优秀猪瘟疫苗,本试验利用铁蛋白作为展示平台,将CSFV E2基因与铁蛋白基因串联,并克隆至表达质粒中。将重组表达质粒瞬时转染HEK293细胞,经CSFV E2抗原捕获ELISA检测,证明了重组蛋白成功表达并分泌到上清中。随后,通过Western blotting试验表明,利用抗His标签单克隆抗体成功检测到FR(FR-SP1和FR-GT6)和FR-E2(FR-E2-SP1和FR-E2-GT6)的表达,同时利用CSFV特异性单克隆抗体WH303进一步证明FR-E2-SP1和FR-E2-GT6成功表达。经负染透射电镜,观测到FR和FR-E2均成功组装成直径大小为10-15 nm的纳米颗粒。随后,构建了稳定表达FR-E2纳米颗粒的ExpiCHO悬浮细胞系,经流式细胞分选术,获得阳性细胞系,即为稳定表达FR-E2的ExpiCHO细胞系。接下来,通过间接ELISA方法分析了 FR-E2纳米颗粒的抗原性,结果表明FR-E2纳米颗粒与CSFV C株E2蛋白和Shimen株E2蛋白具有相似的抗原性。最后,将Sigma佐剂系统与FR-E2纳米颗粒按1:1(v/v)的比例接种至小鼠体内,并检测小鼠产生的中和抗体水平。结果表明,FR-E2纳米颗粒具有比E2蛋白更好的免疫原性,能够刺激小鼠产生更高水平的中和抗体。综上,本试验构建的FR-E2自组装纳米颗粒是一种具有潜力的新型猪瘟疫苗,同时也具有开发作为猪瘟诊断抗原的潜力。