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弥漫性脑损伤(DBI)属于闭合性颅脑损伤，是神经外科常见的急症，残、死率甚高，合并二次脑损伤(SBI)后，病情更加严重。据美国创伤昏迷资料库统计：每年昏迷患者中，DBI患者占55％。此外，美国重型颅脑损伤救治指南显示：约2/3的重型脑损伤患者入院前有缺氧和低血压发生，入院后有1/3发生，这些SBI因素可明显恶化脑损伤患者的预后。由于大多数DBI不适合手术治疗，因而DBI的治疗热点主要集中在神经保护剂上，但到目前为止，几乎所有的神经保护剂都未通过Ⅲ期临床试验。代谢型谷氨酸受体(mGluR)是新近发现的一类谷氨酸受体，目前可将mGluRs分为三组，资料表明，第Ⅲ组mGluRs激活后会产生神经保护作用，这为DBI及其合并SBI后神经保护治疗带来新的希望。本实验在MarmarouDBI模型的基础上，建立大鼠SBI模型，研究DBI及其合并SBI后第Ⅲ组mGluRs(mGluR4、mGluR6、mGluR7与mGluR8)mRNA转录变化，探讨第Ⅲ组mGluRs特异性激动剂L-AP4的神经保护作用。 一、DBI及其合并SBI动物模型的建立：目的 建立大鼠DBI合并SBI模型。方法 SD大鼠随机分为正常对照、假手术、单纯缺血、单纯DBI和合并SBI五组。单纯DBI参照Marmarou模型制作；在DBI基础上，结扎双侧颈总动脉30min，制成合并SBI大鼠模型。观察各组大鼠神经功能损害评分 第 四 旱 医 大 学 硕 士 学 位 论 文 一 仰SSX脑组织含水量和皮层损伤神经元数。结果与单纯DBI相比，①合并 SBI组大鼠死亡率明显升高po 0．05）：u SS明显升高（P＜．05）；③额叶脑组 织含水量除lh组外，其他时间组均明显升高，168h后仍未恢复正常（＜0．05）； ④顶叶室上区皮层损伤神经元数 12h后还在持续升高，至 168h仍高于假手 术组po 0乃5卜结论SBI可增加大鼠DBI后死亡率、加重DBI后创伤性脑水 肿和神经元损伤，这种SBI大鼠模型可复制SBI的重要临床特征，可用来研 究大鼠DBI合并SBI后的病理生理过程，为进一步实验奠定坚实基础。 H、DBI及其合并SBI后脑皮层第＊组mGIuRs mRNA改变的研究：目 的研究 DBI及其合并阳I后第Ill组 mGluRs InRNA转录情况。方法在 DBI 与SBI模型基础上，采用原位杂交方法，分别检测伤后lh、6h、12h、24h、 72h及 168h第＊组 mGluRs mRNA转录变化，观察顶叶室上区皮层阳性神经 元数量，并利用Quanhment 570C图像分析系统进行灰度分析，计算反应强 度。结果脑损伤后mGluR6转录变化不大（P＞0．05）：单纯手术操作对它们的 mRNA转录无明显影响卜0．05＞ 单纯脑缺血对mGluR4和mGIuRS 111．－－uxA 转录无明显影响卜0刀5），而单纯脑缺血6h后mGluR7阳性神经元数明显增 加，其杂交信号反应强度则在损伤后lh 就明显升高，一直持续至 24N＊＜0刀匀：与假手术组相比，单纯＊SI及合并SSI组m＊aa、m＊aa7 和mGluRS mllNA转录在损伤后 lh即有明显增加（P＜0．05＞ 单纯DBI组 InRNA转录于伤后6h达到高峰，以后逐渐下降，并于7d后恢复正常，而合 并 SBI组 InRNA转录伤后 6h还在增加，于 12h达到高峰，届时单纯 DBI 组和合并SBI组InRNA转录亦有显著差异（＜0．05卜结论单纯DBI后 mGIuR4、mGIuR7、和mGluRS表达明显增加，合并SBI后表达增加更为明 显，且持续时间延长，提示可利用第Ill组mGluRs特异性激动剂来治疗DBI 及其合并SBI。 三、第Il组mGluRs特异性激动剂LAP4神经保护作用的研究：目的探 讨第ill组nGluRs特异性激动剂L－AP4对DBI及其合并SBI后损伤脑组织的 神经保护作用。方法在单纯DBI及其合并sBI后，脑室注射L－APO00 V M，10 p l）或生理盐水＊），观察大鼠行为、脑组织含水量及皮层损伤神经 元数变化。结果L．AP4对DBI后大鼠死亡率、皮层损伤神经元数量及脑组 第4页 第 四 旱 医 大 学 硕 士 学 位 论 文 一 织含水量无明显影响o一0．05）；但可降低DBI合并SBI后的脑组织含水量， 减少皮层损伤神经元数o＜o．05）。结论L APAP4对＊m合并881后损伤脑组 织有一定的保护作用。 综上所述，DBI发生后，除mGluR6外，脑皮层第Ill组mGluRs rllluYH 转录明显升高，合并SBI后升高更为明显，且持续时间更长，DBI合并SBI 时，第Il组mGluRs特异性激动剂LAP4有一定的神经保护作用。