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机体各组织器官的氧浓度不同。在长期进化过程中,各种免疫细胞形成了精细复杂的氧感受器以及对低氧(Hypoxia)适应的调节机制,而在疾病状态下,长期的极低氧和极低氧/复氧震荡致使组织细胞、血管内皮细胞以及多种免疫细胞对低氧适应机制的失代偿,进而造成免疫分子、免疫细胞之间相互调控网络的失衡,导致败血症、自身免疫性疾病如类风湿性关节炎、炎性肠病和系统性红斑狼疮等长期慢性炎症、肿瘤、外伤等疾病经久不愈。树突状细胞(DC)是联络固有免疫和适应性免疫的桥梁,也是适应性免疫的启动者、增强者以及调控者。DC对免疫应答的启动、增强还是终止、抑制、指导不同T细胞亚群的分化都取决于其功能状态和亚群,而DC的功能状态受到其所处微环境的影响。炎症微环境中的多种炎性因子促进DC的进一步成熟,增强其诱导炎性Th细胞的能力,加重炎症进展。补体C5a是补体系统功能最强的过敏毒素,在许多炎症性疾病中发挥重要的炎症介质作用,如类风湿性关节炎、败血症等。C5a是炎性微环境中的一类主要内源性炎性因子,能招募并促进髓系细胞,如单核细胞、单核巨噬细胞和未成熟DC释放炎性因子,促进未成熟DC的成熟活化。C5a的生物学效应是通过其受体-C5aR1(CD88)和C5L2完成的。其中,C5aR1属于G蛋白偶联受体超家族成员,是目前公认的介导C5a生物学效应的主要受体,广泛表达于多种免疫细胞表面。在一些炎症性疾病中,炎症部位的低氧因素有可能通过调控炎性细胞表达C5aR1影响C5a介导的炎症反应进展,而相关研究目前尚未见报道。短链非编码RNA(microRNAs)通过转录后修饰机制调节基因表达来适应细胞低氧的现象和机制现已逐渐被发现并证实。越来越多的证据显示低氧调节特定低氧相关microRNAs的转录、成熟及功能。miR-210是目前公认的一个最主要低氧相关microRNA,在低氧适应反应中有着重要作用,也是目前低氧诱导microRNA的研究焦点。然而,有关于miR-210的研究大多数集中在肿瘤,最近有研究显示miR-210通过影响Th17的分化在自身免疫疾病等炎性疾病中也发挥着重要的作用。因此,发现新的受低氧控制的microRNA,了解其对炎症信号通路的影响有助于对炎症性疾病病理机制的认识。单核细胞是一类炎性细胞,并且在炎症过程中,可以被诱导分化为炎性DC,从而参与炎症的进展。炎症部位的低氧微环境是否可以通过影响单核细胞分化为炎性DC,并且影响单核来源DC表达C5aR1,从而调控C5a介导的炎症反应以及炎症性疾病的病理过程,是我们这个课题前期研究的主要思想。我们的前期结果发现:单核细胞在极低氧(<2%)不能够分化为成熟的DC,但高表达C5aR1(CD88);并且这些低氧条件的单核来源的未成熟DC对C5a及其衍生物C5adesArg的刺激具有高反应性;初步的分子机制研究证实了低氧上调MoDC表达C5aR1是依赖HIF信号通路负向调控GM-CSF/STAT5、IL-4/STAT6信号通路实现的。至此,本课题从microRNA角度,围绕低氧抑制GM-CSF/STAT5、IL-4/STAT6信号通路,深入研究了低氧上调MoDC表达C5aR1的分子机制。在本课题中,我们以单核来源DC为研究对象,利用miR组学分析、siRNA转染、免疫共沉淀、CIA模型等实验技术,发现:低氧通过HIF-1信号通路诱导miR-342-3p和miR-210的表达上调;其中miR-342-3p通过直接靶向STAT5b和靶向降解羧肽酶USP13负向调控STAT5、STAT6的组成型表达,抑制GM-CSF/STAT5、IL-4/STAT6信号通路,从而参与介导了低氧上调MoDC表达C5aR1;miR-210通过直接靶向但促进PTPN1的表达负向调控STAT5、STAT6的磷酸化从而抑制了STAT5、STAT6信号通路的活化,进而参与介导了低氧上调MoDC表达C5aR1。在II型胶原诱导的实验性关节炎模型(CIA)中,miR-342-3p和miR-210的血清水平与疾病的进展具有显著的相关性,并且我们通过miR-342-3p和miR-210的拮抗剂和模拟物对诱导两周的CIA小鼠进行体内干预发现,抑制miR-342-3p和miR-210能够降低CIA的疾病严重程度,而过表达miR-342-3p和miR-210则加重,进一步证实了miR-342-3p和miR-210在CIA病理过程中发挥致病作用。综上,我们基于MoDC,对C5a相关关节炎的病理过程做出如下推测,受累的炎性关节腔内的低氧因素诱导进入炎症部位的单核细胞高表达miR-342-3p和miR-210,后二者分别通过USP13和PTPN1抑制微环境中的炎性因子GM-CSF和IL-4诱导信号通路STAT5和STAT6的活化,从而抑制单核细胞分化为成熟DC,这些未成熟的MoDC具有较强的摄取关节腔内自身胶原抗原,和高表达C5aR1的特征,在C5a及其衍生物存在的情况下,能够被诱导成熟;这些摄取了关节腔内自身抗原的DC进入外周淋巴器官后,诱导自身反应性T的分化活化,从而推动C5a相关关节炎的病理过程。本研究将炎性反应中的低氧、C5a/C5aR1、DC三个因素联系起来,从miR层面上,对低氧引起MoDC上调C5aR1表达的分子机制做出了新的解释,丰富了对低氧和C5a相关炎性疾病病理机制方面的认识;也为miR-342-3p和miR-210,在C5a相关的炎性疾病中作为潜在的血清标志物或者药物靶点的设计提供了有力的实验依据。