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目的研究mda-7基因对宫颈Hela细胞生长及凋亡作用。方法采用DNA重组技术,构建mda-7真核表达载体pCDNA3.1(-)-mda-7,用电击法将重组质粒及空载体转染宫颈癌Hela细胞,用G418筛选mda-7基因稳定转染克隆。经逆转录酶链反应(RT-PCR)鉴定mda-7mRNA表达后,用MTT法检测Hela细胞的体外增殖能力、hoechst33258荧光染色和流式细胞术检测宫颈癌Hela细胞的凋亡。结果1.经G418筛选,一周后阴性对照组全部死亡,空载体组和mda-7组形成少量细胞克隆,两周时空载体组和mda-7组形成大量细胞克隆。2.半定量RT-PCR法三组Hela细胞中都可见mda-7mRNA的表达,阴性对照组、空载体组及mda-7组Hela细胞中mda-7 mRNA相对表达水平分别是(0.56±0.003、0.55±0.007、0.92±0.005)。三组Hela细胞中mda-7 mRNA相对表达水平比较,差异具有统计学意义(F=5280.849,P<0.001)。空载体组和阴性对照组细胞中mda-7mRNA相对表达水平比较,无显著性差异(P>0.05),两者与mda-7组细胞之间mda-7mRNA相对表达水平比较,有显著性差异(P<0.05)。3.MTT比色法Mda-7组和空载体组Hela细胞的吸光度值相比,具有显著性差异(P=0.000),Mda-7组和阴性对照组的Hela细胞相比,具有显著性差异(P=0.000),阴性对照组和空载体组的Hela细胞相比,差异无明显统计学意义(P=0.149)。与空载体组和阴性对照组相比,mda-7组的Hela细胞的体外增殖最慢,而空载体组和阴性对照组的生长曲线几乎平行。4.Hoechs染色法空载体组和阴性对照组细胞核形态正常,而实验组(Mda-7组)中Hela细胞皱缩、体积变小、核固缩、边聚形成半月小体,可见凋亡细胞和凋亡小体。5.流式细胞仪法阴性对照组、空载体组和实验组(mda-7组)的Hela细胞的早期凋亡率分别是(6.9%、8.13%、20.12%)。三组HeLa细胞早期凋亡率比较,差异具有统计学意义(F=350.499,P<0.05)。Mda-7组的早期凋亡率分别与阴性对照组、空载体组相比较,差异具有明显的统计学意义(P<0.05)。阴性对照组和空载体组的凋亡率比较,差异无明显的统计学意义(P=0.053)。结论1.稳定转染mda-7基因的宫颈癌Hela细胞体外生长受限。2.Mda-7基因对宫颈癌Hela细胞有促调亡作用。