【摘 要】
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目的:原发性肝癌是目前我国第4位常见恶性肿瘤及第2位肿瘤致死病因,严重威胁我国人民的生命和健康。肝细胞癌（hepatocellular carcinoma,HCC）占原发肝癌的70~90%。其起病隐匿,发展迅速,具有致死率高、不易诊断和预后较差的特点。只有大约20%的新诊断患者有机会接受潜在治愈的治疗方案,如肝移植、手术切除和射频消融。尽管最常用的治疗方案是肝切除术,但约70%的患者会复发,30%
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目的:原发性肝癌是目前我国第4位常见恶性肿瘤及第2位肿瘤致死病因,严重威胁我国人民的生命和健康。肝细胞癌（hepatocellular carcinoma,HCC）占原发肝癌的70~90%。其起病隐匿,发展迅速,具有致死率高、不易诊断和预后较差的特点。只有大约20%的新诊断患者有机会接受潜在治愈的治疗方案,如肝移植、手术切除和射频消融。尽管最常用的治疗方案是肝切除术,但约70%的患者会复发,30%的患者在术后5年内死于肿瘤。揭示HCC的潜在机制可能对提高治疗效果至关重要,因此研究可抑制HCC细胞转移的关键因子有助于提高HCC的治疗效果和改善预后。但HCC是多种因素导致恶性肿瘤发生发展的复杂疾病,目前其病因和发病机制尚未完全清楚。除了蛋白质编码基因的突变或异常表达外,非编码RNA（non-coding RNA,nc RNA）,尤其是长链非编码RNA（long non-coding RNA,lnc RNA）的突变和异常调节似乎在癌症中发挥着重要作用。研究发现LncRNA FAM230B参与某些癌症的肿瘤生长、细胞分化和凋亡。然而目前尚未报道LncRNA FAM230B与HCC的关联及影响。本研究拟明确lnc RNA FAM230B是否调控HCC细胞增殖、迁移、侵袭和上皮间质化（Epithelial-tomesenchymal transition,EMT）,及其作用机制的研究。研究方法:以癌旁组织和肝细胞L02为对照,RT-q PCR检测HCC组织及细胞Hep G2、Huh7、SMMC-7721中LncRNA FAM230B的表达,并分析LncRNA FAM230B表达与90例患者临床病理因素的关系;star Base在线数据库预测miR-1-3p是LncRNA FAM230B的潜在下游靶标,双荧光素酶报告验证LncRNA FAM230B对miR-1-3p的靶向调控关系;将HCC细胞Hep G2、Huh7分为对照组、si-NC组、si-FAM230B组、pc DNA组;pc DNA-FAM230B组、FAM230B+miR-NC组、FAM230B+miR-1-3p组;通过Lipofectamine 2000将质粒分别或者联合转染进入各组细胞;MTT法及细胞集落形成数目检测细胞增殖能力;划痕实验检测细胞迁移能力;Transwell小室实验检测细胞侵袭能力;Western blot法检测上皮型钙黏蛋白（E-cadherin）、神经型钙粘附蛋白（N-cadherin）、磷脂酰肌醇3激酶（PI3K）、蛋白激酶B（AKT）的表达,免疫组化染色观察肿瘤组织PI3K、AKT的表达;裸鼠成瘤实验检测体内移植瘤的发展。结果:与癌旁组织相比,HCC组织中LncRNA FAM230B水平升高,miR-1-3p水平降低,且LncRNA FAM230B与miR-1-3p水平呈现负相关;LncRNA FAM230B水平与肿瘤大小、TNM分期、微血管浸润存在正相关的关系（P＜0.05）。与L02相比,HCC细胞Hep G2、Huh7、SMMC-7721中LncRNA FAM230B上调,miR-1-3p下调（P＜0.05）;LncRNA FAM230B与miR-1-3p存在结合位点,LncRNA FAM230B直接靶向作用于miR-1-3p,过表达LncRNA FAM230B抑制miR-1-3p的表达（P＜0.05）;LncRNA FAM230B过表达能够上调N-cadherin、PI3K、AKT水平,下调E-cadherin水平,促进细胞增殖,增加划痕愈合和侵袭细胞数,促进移植瘤生长（P＜0.05）;而miR-1-3p可部分逆转LncRNA FAM230B对HCC细胞的恶性表型。结论:LncRNA FAM230B通过靶向miR-1-3p促进HCC细胞的增殖、迁移、侵袭、EMT及体内移植瘤的发展,可能通过激活PI3K/AKT信号通路发挥作用。
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