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很多人没有意识到,任何化妆品在有益于皮肤的同时,也是微生物生长和繁殖的好地方,它们非常小,不能用肉眼看到,但是在有足够营养的培养基上,细菌和真菌就可以快速生长成为菌落,我们用肉眼就可以看见菌落的颜色、状态。过量的细菌、真菌可以从这几个方面来破坏化妆品的质量:(1)引起恶臭的气味;(2)破坏化妆品,使其分层;(3)引起颜色的改变;(4)致病菌产生毒素,引起皮肤瘙痒和严重的感染,对消费者产生危害。更严重的是,如果是眼部的化妆品被污染致病,还会造成失明。检测化妆品中微生物传统的方法是APC(平板计数法)。这种方法就是稀释化妆品产品,把一部分涂在加特殊营养的平板培养基上,培养过后根据菌落的形态和理化性质来判断属于那种致病菌。但是这种传统的方法周期长,耗时耗力,因此建立一种快速的检测化妆品中致病菌的方法至关重要。本实验就是针对化妆品中常见的致病菌做系统的研究,建立一种快速检测化妆品中致病菌的基因芯片,快速、高效率的达到检测的目的。 本研究筛选了12种常见的化妆品致病菌为研究目标,使用基因芯片技术,利用细菌的16S rRNA-23S rRNA基因间区、真菌的18S rRNA-28S rRNA基因间区和志贺氏菌的ipaH基因为目的基因,设计并筛选出检测基因芯片中白色念珠菌、新生隐球菌、志贺氏菌、藤黄微球菌、金黄色葡萄球菌、化脓链球菌、沙门氏菌、奇异变形杆菌、弗氏柠檬酸杆菌、铜绿假单胞菌、产气肠杆菌、斯氏普罗威登斯菌的特异探针,建立检测化妆品中常见致病菌鉴定的基因芯片。 以细菌和真菌的ITS(internal transcribed spacer)和志贺氏菌的ipaH基因为目的基因,设计12种化妆品中常见致病菌探针,经过生物信息学和实验过程的反复筛选,确定了31条特异的探针,再加上1条真菌的正对照探针、1条细菌正对照探针,1条阴性对照探针和1条荧光标记探针,共计35条探针,这35条探针制成了基因芯片,并且优化实验条件,包括多重PCR引物比例、PCR退火温度、芯片杂交温度、芯片杂交时间等,还做了基因芯片的性能评价,包括特异性、盲测、多种菌检测、灵敏度检测、模拟样品实验、实际样品实验等,结果良好,说明本芯片可靠,灵敏度高,很适合化妆品中常见致病菌的检测。