目的:制备人失活型c-Jun氨基末端激酶3(dnJNK3)转基因小鼠,利用活化型TGF-β激活激酶过表达(caTAK1)转基因小鼠及失活型JNK3(dnJNK3)转基因小鼠制备caTAK1/(dnJNK3转基因小鼠;利用caTAK1转基因小鼠观察下颌骨中MAPK相关基因的相对表达水平,进一步寻找TAK1在牙齿发育作用中的下游信号分子。利用转基因动物模型初步观察caTAK1/dnJNK3小鼠牙齿釉质发育。从组织学水平初步研究TAK1-MAPK信号通路对牙釉质形态及发育的影响,为研究TAK1-MAPK信号通路对釉质发育形成中的作用机制奠定科学基础。方法:利用基因芯片、RT-PCR检测活化型TAK1小鼠下颌磨牙区MAPK相关基因的相对表达水平。免疫组化检测出生后5天野生型小鼠成釉细胞JNK1(MAPK8)、JNK2(MAPK9)、JNK3(MAPK10)蛋白的表达水平。Western Blot检测活化型小鼠及野生型小鼠下颌骨内JNK3蛋白的表达水平。克隆小鼠釉原蛋白(Amelogenin,Amelx)启动子及人JNK3编码区基因,扩增人失活型JNK3编码区基因。构建转基因表达载体:将人失活型JNK3基因插入Amelx启动子下游,显微注射将JNK3表达载体注入小鼠受精卵,进而构建人源性失活型JNK3转基因C57小鼠。dnJNK3及caTAK1/dnJNK3转基因小鼠的基因型采用PCR方法进行鉴定,外源性JNK3基因的表达运用RT-PCR方法进行检测。利用caTAK1小鼠及dnJNK3小鼠合笼交配繁殖caTAK1/dnJNK3转基因小鼠。运用体视显微镜及扫描电镜观察转基因小鼠磨牙釉质的形态色泽及牙尖磨损情况。结果:基因芯片及RT-PCR检测发现caTAK1小鼠下颌骨内JNK3基因表达水平与野生型小鼠相比显著上调;免疫组化结果显示野生型型小鼠成釉细胞内JNK3蛋白表达较强,而JNK1、JNK2几乎没有表达;成功克隆小鼠Amelx启动子基因及人失活型JNK3基因,成功构建人失活型JNK3重组表达质粒;构建失活型JNK3转基因表达载体;制备了人失活型JNK3转基因小鼠,在小鼠颌骨组织中,JNK3基因的表达具有特异性。体视显微镜及扫描电镜分析显示:caTAK1小鼠的磨牙釉质表面有点状凹陷,釉质呈白垩色,牙尖磨耗较野生型明显;而caTAK1/dnJNK3小鼠磨牙釉质外观及磨耗程度与野生型小鼠无明显区别。出生6个月,caTAK1/dJJNK3转基因小鼠磨牙釉质外观及磨耗程度与野生型小鼠无明显区别。结论:活化型TAK1小鼠下颌骨内JNK3表达水平显著上调;TAK1小鼠牙釉质发育不良,容易产生病理性磨损;而caTAK1/dnJNK3小鼠牙釉质发育与caTTAK1小鼠相比有明显改善,釉质外观及磨耗程度与野生型小鼠无明显差别。因此,我们推断JNK3或是牙釉质发育过程中TAK1/MAPK信号通路的下游重要信号分子,TAK1/JNK3信号通路影响牙釉质发育。